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husthl铁虫 (初入文坛)
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[求助]
求助大肠杆菌感受态制备方法大全
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各位虫友们，我最近在制备大肠杆菌感受态，效果不是很好，请问大家又木有比较好的制备方法，跟我分享一下呗。 谢谢。。。 |
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4楼2013-03-17 11:15:14
chunhua0312
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 638.8
- 帖子: 37
- 在线: 105.6小时
- 虫号: 2344405
- 注册: 2013-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-03-15 15:40:19
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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我们实验室制作E.coli感受态的方法： 1.将保存的菌液在抗生素平板上划线，37℃倒置培养12--16h。 2.挑取直径约1mm的单菌落接入5ml LB中，37℃，200rpm振荡至OD600=0.5. 3.将菌液加入2ml离心管中，4000rpm，4℃，5min，弃培养液。（离心三次） 4.加入1ml预冷的0.1 M CaCl2，低速涡旋打匀。 5.4000rpm，4℃，离心10min，弃上清。 6.加入200微升预冷的0.1M CaCl2,涡旋打匀。 7.加入等体积15%甘油，液氮速冻，—80℃保存。 这是小量制取的方法，也可以用多摇点菌液大量制取。 |
3楼2013-03-15 16:21:28
