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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助大肠杆菌感受态制备方法大全
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husthl

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助大肠杆菌感受态制备方法大全

各位虫友们，我最近在制备大肠杆菌感受态，效果不是很好，请问大家又木有比较好的制备方法，跟我分享一下呗。
谢谢。。。
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向风一样的双子女
1楼 2013-03-14 10:11:58
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chunhua0312

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分子克隆实验指南上已经做了很好的概括。
个人认为三点需要确认：1 所用的菌种。2 所用的处理试剂。3 整套流程的洁净程度和低温操作。
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绿露
2楼2013-03-15 15:40:19
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zhanggu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室制作E.coli感受态的方法：
1.将保存的菌液在抗生素平板上划线，37℃倒置培养12--16h。
2.挑取直径约1mm的单菌落接入5ml LB中，37℃，200rpm振荡至OD600=0.5.
3.将菌液加入2ml离心管中，4000rpm，4℃，5min，弃培养液。（离心三次）
4.加入1ml预冷的0.1 M CaCl2，低速涡旋打匀。
5.4000rpm，4℃，离心10min，弃上清。
6.加入200微升预冷的0.1M CaCl2,涡旋打匀。
7.加入等体积15%甘油，液氮速冻，—80℃保存。

这是小量制取的方法，也可以用多摇点菌液大量制取。
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3楼2013-03-15 16:21:28
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cobble_hu

新虫 (初入文坛)
宝生物有卖的，300大洋100微升*10管
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4楼2013-03-17 11:15:14
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