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Jesse.Goo

铁虫 (初入文坛)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳的Marker为什么会出现“山”字样的条带

琼脂糖凝胶电泳的Marker为什么会出现“山”字样的条带(重新换过缓冲液,也重新换过新的Marker),求解释???<具体请看下图>
我是提取一重组菌的质粒验证其是否丢失了质粒,其中第一、二道分别是一旧、一新的Marker,最右边的也是同一新换的Marker。我用的是1%的琼脂糖凝胶,点样量为5µL。

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熊大斌

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
可能胶配的有问题
2楼2013-03-13 22:48:16
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该不是胶的问题 旁边的跑的好好的 可能是你的Maker出问题了
3楼2013-03-14 13:27:46
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Jesse.Goo

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxl.1989822 at 2013-03-14 13:27:46
应该不是胶的问题 旁边的跑的好好的 可能是你的Maker出问题了

换过新的λ HindⅢMarker也不行。昨天把Marker65℃处理5分钟,在冰上放5分钟,点在中间跑的条带还行。可是第二次做酶切是同样处理,Marker还是不行,但是另一个Marker(DL2000)的条带跑的还行。另外,我感觉我提的质粒蛋白等杂质太多,用酚氯仿抽提了三次结果质粒没有了,抽提少了又拖带太长,怎么处理,听说点样前把样品水浴几分钟有效果吗?恳请赐教!!!O(∩_∩)O谢谢
要理解生活,需要往后看;要过好生活,必须往前看。
4楼2013-03-16 09:11:10
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2013-03-27 13:40:09
gyesang: 回帖置顶 2013-04-27 14:42:41
质粒提取如果自己配试剂的话比较麻烦,时间长就不说,关键是操作步骤多,生物实验中特别是提取,步骤越少越好,步骤少损失就少,还有就是操作技术要相当好才能高产提取。
你这个胶跑的有问题,marker没有问题,跑胶的时候电压要稳定,胶板要放顺,还有就是跑的时候尽量让胶板不要动,有时候缓冲液过多胶板会漂走的,如果这都没有问题那就检查一下设备,电场不均匀也会导致异常的.....
希望能帮到你........
益学善用
5楼2013-03-27 13:04:09
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-11 21:39:25
建议使用试剂盒提取质粒,如果想要高浓度的质粒的话还有回收试剂盒可以用,这些个都是商品化的东西,还比较好用.....
益学善用
6楼2013-03-27 13:05:30
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shabz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-11 21:39:34
出现山峰形 不是maker吧 左边和最右边的marker 很正常
7楼2013-09-11 20:39:44
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