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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！怎样用试剂盒提取用大肠杆菌转化了的质粒DNA，100ul溶液中含30-50ug
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a406123610

铜虫 (正式写手)

[求助] 求助！怎样用试剂盒提取用大肠杆菌转化了的质粒DNA，100ul溶液中含30-50ug

求助！怎样用试剂盒提取用大肠杆菌转化了的质粒DNA，100ul溶液中含30-50ug，我提的只有100ul溶液中含2-3ug，请高手指教！灰常感谢！
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1楼 2013-03-01 20:55:17
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提的浓度是2 ug/100ul，也就是2000ng/100 ul，即20 ng/ul对吧？确实有点低，我提的都是100 ng/ul左右，但这取决于你用的什么试剂盒，还有你用的初始材料，菌液的体积？长得如何？我一般都是过夜摇的试管，取2ml提。
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2楼2013-03-01 21:07:59
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a406123610

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-01 21:07:59
你提的浓度是2 ug/100ul，也就是2000ng/100 ul，即20 ng/ul对吧？确实有点低，我提的都是100 ng/ul左右，但这取决于你用的什么试剂盒，还有你用的初始材料，菌液的体积？长得如何？我一般都是过夜摇的试管，取2ml提 ...

用的试剂盒是Plasmid Mini Kit I (100),D6943-C1,菌液5ml过夜摇12-15h,请问你用的是什么试剂盒，点多少大肠杆菌到装有培养液的试管中？我想要得到100ul溶液中含30-50ugDNA，除了试剂盒、菌液等原因，可以用其它方法浓缩吗？
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3楼2013-03-01 21:36:00
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
你连载体的origin都没说，怎么知道到底能提多少
不同载体copy数差几十倍到上百倍
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4楼2013-03-01 22:37:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些质粒的拷贝数低，提出来的量自然少。一般多摇些菌。提完觉得太稀的话可以用乙醇沉淀浓缩。
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5楼2013-03-02 04:47:22
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潇之天下

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
限制条件很多；
包括：摇菌时间，质粒拷贝数；试剂盒是否为大提试剂盒；solution少加点；多管合并；提前预热的试剂；PH最好在7-8；甚至如果不是做转染等后续实验，可乙醇沉淀。
祝你好运！
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修行人
6楼2013-03-02 13:13:53
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alicelchf

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a406123610 at 2013-03-01 21:36:00
用的试剂盒是Plasmid Mini Kit I (100),D6943-C1,菌液5ml过夜摇12-15h,请问你用的是什么试剂盒，点多少大肠杆菌到装有培养液的试管中？我想要得到100ul溶液中含30-50ugDNA，除了试剂盒、菌液等原因，可以用其它方法 ...

你板子长的正常？摇菌混浊？度
通常你的条件是不会那么低的，加大体积也不会有变化，过多并不见得好
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修身、齐家、治国、平天下
7楼2013-03-03 09:25:54
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果有真空干燥器就好办，多提几管混合之后，用它抽干就可以了。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
8楼2013-03-04 18:47:16
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