24小时热门版块排行榜    

查看: 999  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核蛋白表达几个疑问

最近本人在做蛋白原核表达,有些疑问一直没弄明白!
1.IPTG诱导蛋白后,什么情况是直接加裂解液离心后加上样缓冲液跑SDS-PAGE?什么情况需要超声后离心跑电泳呢?
2.尿素是什么时候用?加在哪里的呢?
3.细胞裂解液自己配的,丁香园查的配方有几种版本,有的加SDS,有的加吐温,有的只是Tris-hcl,nacl,这些,要怎么选择呢?
做了这么久western blot一直没搞懂这些问题!
希望高手指点!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果你要看IPTG是否能诱导出目的蛋白,可以直接收集菌体后加SDS上样buffer后跑胶。因为SDS上样buffer本身能裂解细菌,不用超声,得到的样品是细菌总蛋白。
超声是为了得到可溶的活性蛋白。确定IPTG诱导成功后要确定目的蛋白是以可溶形式存在的还是在包涵体里面。是用不含SDS的裂解液,超声后离心取上清得到可溶蛋白,然后取总蛋白、可溶蛋白、沉淀三个样品跑SDS-PAGE。
尿素是为了把包涵体中的变性蛋白复性时用的。
细胞裂解液的成分要根据不同的目的配制。
3楼2013-03-01 00:58:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
IPTG诱导表达的蛋白加裂解液后一般还是需要超声裂解的,没见过不超声的。
尿素溶液促进蛋白质变性,如果表达的蛋白非可溶蛋白,裂解后加入一定浓度尿素溶液,可以使沉淀蛋白溶解,用于蛋白纯化等后续步骤。若是可溶性蛋白,应该是用不上的。
无论是SDS,还是吐温都是去污剂,区别在于你要去污的类型,至于主要用什么,我不是很清楚。
认真过好每一天!
2楼2013-02-28 20:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见