24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shiliyusly

新虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 265.4
帖子: 138
在线: 71.5小时
虫号: 1434769

[交流] QPCR扩增效率太低

大家好，我做QPCR基因扩增效率的时候，一个基因由于CT太大，所以只进行4个2倍的稀释度，二步法退火温度是61度扩增效率不高只有78%（图1）溶解曲线（图3），所以我做了三步法退火温度59度扩增效率反而更低了只有57%（图2）溶解曲线（图4），很奇怪，请教下大家看这是什么原因，该怎么改进呢？有看到资料说把引物浓度提高，不知道效果怎样。

图1.jpg

图2.jpg

图3.jpg

图4.jpg

回复此楼

» 本帖@通知

@cicelyzh

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

QPCR之扩增效率已经有8人回复
QPCR 溶解曲线已经有9人回复
qPCR的标准曲线成线性很差，扩增效率低，是什么原因已经有6人回复
求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！已经有14人回复
相对定量中怎样提高扩增效率已经有5人回复
real-time PCR相对定量2 -△△CT法中用来判断扩增效率的标准曲线怎么制作？已经有8人回复
着急！RT-PCR扩增效率低，情况很诡异，求助高手帮忙指点已经有12人回复
荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了已经有17人回复
荧光定量扩增效率低怎么办已经有3人回复
PCR试剂进行大批量配制分装，却出现了扩增效率低下的结果。已经有11人回复
【求助/交流】实时荧光定量PCR的扩增效率低该如何改进？已经有5人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2013-02-26 23:05:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001

引用回帖:

11楼: Originally posted by shiliyusly at 2013-02-28 15:47:52
刚才我把这个基因做扩增效率的4个浓度中最小浓度去掉了（CT值39），就剩了3个浓度的扩增效率有102%了，溶解曲线图和扩增效率曲线如下图：

A8NV9Y92791ETS2])((LB`G.jpg

(DVP632Y0]JBHW){}E`_H8H.jp ...

CT值在35以上的一般不要用，尽量弄在30以下，实在不行的话33以下。模板浓度很稀的情况，PCR的效率无法接近100%，也就是说增加一个循环，产物浓度不是原来的2倍。