| 查看: 664 | 回复: 1 | ||
[求助]
【困扰数月】连接转化中反复出现同一污染质粒！
|
|
向大家求助一下！【这个问题已经有数月，始终没有解决】 我在做将一个约5kb的载体和一个0.8kb的插入片段进行连接，但是经多次实验均未获得阳性克隆，并且长出的克隆经提质粒后80%均为一个未经线性化时在1.5kb左右的质粒，如何进一步设计实验搞清污染来源？？如何避免此污染再次出现并完成连接转化？？非常感谢大家！ 排除可能：1）第二次实验室我更换整个过程中使用的LB液体培养基，固体平板，出现相同污染；2）同时做了阳性对照组，用相同的插入连段和平末端载体pEASY-Blunt连接，无此污染，连接正常有阳性克隆；3）所用于连接的DNA片段经跑胶验证无误，为清晰的单一条带；4）重新转化并酶切需要使用的载体片段，进行连接时出现相同污染 质粒信息：包含一个CAG启动子，一个T7启动子，及氨苄青霉素抗性基因； |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 在做酶切时不小心用质粒污染了酶,那酶还能用吗
已经有6人回复
- 目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
已经有11人回复
- 导入重组质粒的细菌被杂菌污染，会不会影响测序结果？
已经有4人回复
- 求助连接转化质粒提取
已经有9人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- pMD18-T载体与目的基因连接后构建的质粒能通过接合转移到一些难以转化的细菌中吗？
已经有8人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- 关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】做连接后的质粒是否可以用来做pcr
已经有10人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR96孔板被质粒模板污染的消除
已经有3人回复
2楼2015-05-27 10:33:01
