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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【困扰数月】连接转化中反复出现同一污染质粒！
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sxc920130

新虫 (初入文坛)

[求助] 【困扰数月】连接转化中反复出现同一污染质粒！

向大家求助一下！【这个问题已经有数月，始终没有解决】
我在做将一个约5kb的载体和一个0.8kb的插入片段进行连接，但是经多次实验均未获得阳性克隆，并且长出的克隆经提质粒后80%均为一个未经线性化时在1.5kb左右的质粒，如何进一步设计实验搞清污染来源？？如何避免此污染再次出现并完成连接转化？？非常感谢大家！

排除可能：1）第二次实验室我更换整个过程中使用的LB液体培养基，固体平板，出现相同污染；2）同时做了阳性对照组，用相同的插入连段和平末端载体pEASY-Blunt连接，无此污染，连接正常有阳性克隆；3）所用于连接的DNA片段经跑胶验证无误，为清晰的单一条带；4）重新转化并酶切需要使用的载体片段，进行连接时出现相同污染

质粒信息：包含一个CAG启动子，一个T7启动子，及氨苄青霉素抗性基因；
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1楼 2013-02-25 14:54:05
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潇潇银杏果

新虫 (初入文坛)
我也有相同的困惑，求解?
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2楼2015-05-27 10:33:01
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