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sxc920130

新虫 (初入文坛)

[求助] 【困扰数月】连接转化中反复出现同一污染质粒!

向大家求助一下!【这个问题已经有数月,始终没有解决】
我在做将一个约5kb的载体和一个0.8kb的插入片段进行连接,但是经多次实验均未获得阳性克隆,并且长出的克隆经提质粒后80%均为一个未经线性化时在1.5kb左右的质粒,如何进一步设计实验搞清污染来源??如何避免此污染再次出现并完成连接转化??非常感谢大家!

排除可能:1)第二次实验室我更换整个过程中使用的LB液体培养基,固体平板,出现相同污染;2)同时做了阳性对照组,用相同的插入连段和平末端载体pEASY-Blunt连接,无此污染,连接正常有阳性克隆;3)所用于连接的DNA片段经跑胶验证无误,为清晰的单一条带;4)重新转化并酶切需要使用的载体片段,进行连接时出现相同污染

质粒信息:包含一个CAG启动子,一个T7启动子,及氨苄青霉素抗性基因;
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潇潇银杏果

新虫 (初入文坛)

我也有相同的困惑,求解?
2楼2015-05-27 10:33:01
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