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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于原核表达问题（引物设计和实验思路等）
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无花草

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于原核表达问题（引物设计和实验思路等）

大家好！小弟准备入手做原核表达，苹果茎沟病毒（ASGV）到外壳蛋白（CP）到原核表达，小弟出入这方面，有许多问题不懂，希望有经验到人多多帮助！
1.我现在有ASGV cp的一段序列，不是全序列，从这怎么入手，接下来应该做些什么？（是不是先把cp的全长扩到了，再根据cp全长设计引物？还有这引物怎么设计，要考虑哪些问题？）
希望谁能给我说下做原核表达的思路，包括步骤和用到到实验材料等。
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1楼 2013-02-25 13:56:48
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yang8135299

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，是否需要全长CP蛋白序列，要看你最终是否需要病毒完整的外科蛋白进行下一步的实验。
其次，若不需要全场蛋白，你使用这段序列做原核表达也要做相应的生物信息学分析，以作为支持你选择这段CP序列的理论依据。
例如：原核表达蛋白做抗血清的抗原使用时，优势抗原表位是否在你所表达的这段蛋白里面，应该做相应的分析。
另外，ASGV在NCBI上面也有全长序列，如果想获得你样本的CP全长序列也比较容易。
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2楼2013-02-25 16:57:17
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无花草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang8135299 at 2013-02-25 16:57:17
首先，是否需要全长CP蛋白序列，要看你最终是否需要病毒完整的外科蛋白进行下一步的实验。
其次，若不需要全场蛋白，你使用这段序列做原核表达也要做相应的生物信息学分析，以作为支持你选择这段CP序列的理论依据。 ...

谢谢你的回答！
我这原核表达到目的是用表达到蛋白制备抗血清，用来建立一个ASGV检测体系。
1.我想要根据表达蛋白制备抗血清到话，是需要全长cp序列的，别人报道到苹果上相关病毒，也是用到全长序列。
2.比如说我需要做些什么方面到生物学信息分析？包括酶切位点这些什么的？
3.你说的优势抗原表位怎么分析呢？手头有全长序列。
希望你继续帮我解答下，再次感谢你了！
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好好做实验，毕业找份好工作！
3楼2013-02-25 19:53:33
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