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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 高保真KOD和PCR的应用有哪些不同？
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灵岩苏

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amilie030312

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1楼2013-02-21 14:18:13
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
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KOD是保真酶的一种，只要具有3‘-5’校正能力的扩增3‘为平末端的即可成为保真酶。但由于边扩增边校正的关系没有经过改造的保真酶具有扩增能力弱、产量低、速度慢、时间长几个缺点，需要经过对酶的改造来进行弥补。
市面上常见的保真酶有几种：你所说的KOD（TOYOBO公司），Pfu（Stratagene公司，现在属于Agilent），Phusion或者Q5（NEB公司），Pfx（Life公司）等。还有一个是PrimeSTAR（TAKARA公司），个人觉得这个保真度和性能方面照前面几个差了些，不过用的人还不少。再有的就不是什么主流的了，国产的也有一些。
你说的KOD其实有很多种，有一个系列保真度比较好，但扩增能力稍弱，还有一个系列是扩增能力强但保真度稍差一些。
另外，不是所有的常规PCR反应都需要用到保真的酶，随便扩扩看有没有结果的Taq或者混合酶就可以了，毕竟保真的酶价格相对贵些，需要扩增的目的片段不能出现错配时再用这类具有校正能力的保真酶即可。当然，如果钱多的用不完的实验室除外哈，呵呵。
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6楼2013-02-22 16:45:24
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灵岩苏

禁言 (小有名气)
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2楼2013-02-21 14:32:04
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+5, 应助指数+1, 谢谢分析 2013-02-22 06:58:19
KOD也是一种PCR实验中用的酶，和一般用的TAQ相比，其错配率低，准确度比较高，很适用于长片段克隆，同时由于是热启动酶，配置反应体系时也不用冰浴。在使用过程中，与一般TAQ酶没什么区别。
对这个酶（KOD-plus）我个人很推荐，确实错配率很低，对于富含GC的模板扩增效率也不错。另外，购买KOD，随酶还有dNTP和硫酸镁，无需另外购置试剂就可以直接开始使用，很方便。
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3楼2013-02-21 17:26:24
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
具体是否需要高保真酶要根据你的实验目的来决定，一般PCR常规酶即可，高保真只是用于扩增片段准确度要求比较高的情况下。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2013-02-21 17:27:40
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