应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 10kd 和100kd的蛋白同时做western blot
51/1返回列表
查看: 2184  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

章信来

木虫 (正式写手)

[求助] 10kd 和100kd的蛋白同时做western blot已有1人参与

最近在做基因可变剪切的验证实验，预测目标蛋白可变剪切后编码蛋白只有10多KD，而野生型蛋白则有100kd，用常规12%的SDS-PAGE做的WB，结果发现20KD以下就不存在目的片段（PVDF是0.45的，bio-rad湿转，转膜时间是100v*1.5h），是我的转膜时间太长了？PVDF膜孔径太大了？还是要专门的试验方法？
有谁做过类似实验，给个建议！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-01-28 15:49:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

章信来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-30 11:02:08
是需要一个gradient mixer，没有的话不好办。...

谢谢，年后争取搞一个回来！
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-31 08:11:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 常来啊 2013-01-28 22:41:26
试试缩短转膜时间，我用PVDF，半干法，10 V，1 h，可以同时做出来80 kD和17 kD的
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-01-28 20:31:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

章信来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-01-28 20:31:02
试试缩短转膜时间，我用PVDF，半干法，10 V，1 h，可以同时做出来80 kD和17 kD的

谢谢，我今天就尝试下！
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-29 10:58:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-02-01 07:49:42
小蛋白比大蛋白跑得快，无论是电泳还是转膜的时候。觉得你可以做一个10-16%的梯度胶。小蛋白从浓度相对较高的胶里转出来速度会减慢一些。
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-30 09:29:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭