24小时热门版块排行榜    

查看: 2593  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

章信来

木虫 (正式写手)

[求助] 10kd 和100kd的蛋白同时做western blot 已有1人参与

最近在做基因可变剪切的验证实验,预测目标蛋白可变剪切后编码蛋白只有10多KD,而野生型蛋白则有100kd,用常规12%的SDS-PAGE做的WB,结果发现20KD以下就不存在目的片段(PVDF是0.45的,bio-rad湿转,转膜时间是100v*1.5h),是我的转膜时间太长了?PVDF膜孔径太大了?还是要专门的试验方法?
有谁做过类似实验,给个建议!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-02-01 07:49:42
小蛋白比大蛋白跑得快,无论是电泳还是转膜的时候。觉得你可以做一个10-16%的梯度胶。小蛋白从浓度相对较高的胶里转出来速度会减慢一些。
4楼2013-01-30 09:29:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 常来啊 2013-01-28 22:41:26
试试缩短转膜时间,我用PVDF,半干法,10 V,1 h,可以同时做出来80 kD和17 kD的
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-01-28 20:31:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

章信来

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-01-28 20:31:02
试试缩短转膜时间,我用PVDF,半干法,10 V,1 h,可以同时做出来80 kD和17 kD的

谢谢,我今天就尝试下!
3楼2013-01-29 10:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

章信来

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-30 09:29:01
小蛋白比大蛋白跑得快,无论是电泳还是转膜的时候。觉得你可以做一个10-16%的梯度胶。小蛋白从浓度相对较高的胶里转出来速度会减慢一些。

嗯,有道理,不过貌似从没做过梯度胶,没有特殊的灌胶设备能否制胶啊?
5楼2013-01-30 10:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:41 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:21 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:48 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 19:07 by xiangy672
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:29 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:36 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:40 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见