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fayzhao

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切后切胶回收

各位虫友好:
目前,我正在做质粒双酶切,体系40ul:
dd水                       补足40ul
10Xtango buffer     4ul
质粒                       2ug
kpnI                        2ul
bglII                        2ul
37℃反应5h,电泳检测图如下:

目的是为了回收目的条带(300多bp),切胶回收用了takara的和axygen的,都没有回收到,跑胶没有任何条带。接下来我要做的是将目的基因连接到表达载体中,回收不到怎么办哪?求帮助!!!

2013-1-20双酶切_副本.jpg
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alisayan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
fayzhao: 金币+5 2013-01-30 13:16:40
我之前也做过约300bp的片段的克隆,确实比较难做,我建议你可以用PCR的方法,多P几管,再双酶切回收,去连到你的表达载体上,如果像现在这样从现在的载体上酶切得到的目的片段,本来浓度就低,再加上小片段回收效率低点,就更回收不到目的片段了。
付出必有回报
25楼2013-01-28 14:26:10
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