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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] TEV蛋白酶酶切体系是什么样的？

TEV蛋白酶酶切体系是什么样的？
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1楼 2013-01-16 11:48:56
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiapingshk: 金币+10, ★有帮助 2013-01-17 09:30:24
TEV蛋白酶对酶切的缓冲液，温度等条件要求相对宽松，一般我们使用就是 50mMTris7.5 ，500mM NaCl，5%Glycerol，4℃过夜。
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2楼2013-01-16 15:00:13
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2013-01-16 15:00:13
TEV蛋白酶对酶切的缓冲液，温度等条件要求相对宽松，一般我们使用就是 50mMTris7.5 ，500mM NaCl，5%Glycerol，4℃过夜。

请问，如果我做100微升的体系，里面最多加多少微升的蛋白
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3楼2013-01-17 09:32:12
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-17 09:32:12
请问，如果我做100微升的体系，里面最多加多少微升的蛋白...

这得看你的酶的活性了，我们一般是1mg的酶去切100mg的蛋白（可能量有点多，自己做的酶，活性可能差点，但是用的不心疼）。
仅供参考。
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4楼2013-01-17 10:39:59
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2013-01-17 10:39:59
这得看你的酶的活性了，我们一般是1mg的酶去切100mg的蛋白（可能量有点多，自己做的酶，活性可能差点，但是用的不心疼）。
仅供参考。...

如果我的体系一共是100微升，但是往里面加蛋白超过了50微升，会有不良影响吗？谢谢
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5楼2013-01-17 16:59:39
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-17 16:59:39
如果我的体系一共是100微升，但是往里面加蛋白超过了50微升，会有不良影响吗？谢谢...

只要蛋白不沉淀就不要考虑什么其他的影响。
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6楼2013-01-17 17:37:11
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shenwuyan

铁虫 (初入文坛)
有说明说OD280比值在1:100，但是难切的蛋白，也有使用1:5的，我使用过1:8,1:10,1:20，根据蛋白调整tev用量吧。
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taking things as a challenge
7楼2013-04-10 14:24:44
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