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mengpei

金虫 (小有名气)

[求助] 急!求助southern blot相关问题


做了好久Southern blot ,但一直没有结果,真的很急,请高手指点一下。
      用质粒做对照,质粒上有很清楚的带,但植物基因组上仍然没有带,目标片段700bp左右,探针310bp。基因组酶切后PCR可以扩增到目标片段,酶切也很充分。谢谢!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是上样量的问题吗?质粒样品的基因拷贝数肯定比基因组高的,试试做几个不同上样量看看。
2楼2013-01-07 03:05:30
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

孟佩,来这求助了?字数不够不让发

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-01-08 12:24:19
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lostdipper

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这可能是你样品的问题,目的片段拷贝数高么,如果低拷贝建议你提些DNA,多选几株,另外你的700bp在杂交结果上不一定是700吧?难道你在这个片段两端酶切的?
4楼2013-01-10 09:14:15
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mengpei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lostdipper at 2013-01-10 09:14:15
这可能是你样品的问题,目的片段拷贝数高么,如果低拷贝建议你提些DNA,多选几株,另外你的700bp在杂交结果上不一定是700吧?难道你在这个片段两端酶切的?

DNA就是烟草的基因组,用ECRO1酶切的,不是目标片段两端,你的意思是提高DNA的质量?
5楼2013-01-10 16:04:16
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