24小时热门版块排行榜    

查看: 503  |  回复: 2

芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 蛋白表达

本人用的全式金的pEASY-E1表达载体连接我的目的片段,经测序后,提质粒转化bl21诱导表达,37度,4h,但是,空载体,未诱导,以及诱导组在我的目的大小都有比较亮的条带,做his纯化,带很暗,该怎么办啊,求高手指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
虽然有时候未诱导就能有表达,但最好确定是否是目的蛋白,做个Western鉴定一下。此外,优化诱导条件吧,温度、时间、浓度。
2楼2012-12-29 11:12:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bclz

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
空载体及未诱导均有条带,说明该很亮的条带中有一部分是菌体自身的蛋白,只是和你的目的蛋白重合而已;His纯化条带暗说明其实你的目的蛋白表达量很低,甚至有可能是杂蛋白。所以建议从摸索表达条件开始,楼主用的载体我未用过,但是应该差不多,可以适当提高诱导温度试试,比如说18度等。如果有条件,可以拿诱导表达后的菌体做一个目的蛋白特异性的western(非His特异性抗体)检测一下看看。
3楼2012-12-29 15:43:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 芥末猫 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 化学工程321分求调剂 +7 大米饭! 2026-03-15 7/350 2026-03-16 10:25 by 了了了了。。
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 中科院材料273求调剂 +3 yzydy 2026-03-15 3/150 2026-03-15 21:15 by ms629
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 材料专硕326求调剂 +4 墨煜姒莘 2026-03-15 4/200 2026-03-15 11:02 by dyw
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
信息提示
请填处理意见