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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请各位大侠帮忙看看我的聚丙烯酰胺凝胶电泳图
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无形居士2009

金虫 (正式写手)

[求助] 请各位大侠帮忙看看我的聚丙烯酰胺凝胶电泳图

我跑的是非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，从电泳图上看：电泳条带弥散，看不清；发卡结构通过退火后有一部分形成了二聚体结构；
相交各位有经验的神人，是不是我凝胶配置的不好啊？怎么才能减少扩散呢？
我的跑胶条件是：电压 140V  电流25 mA 跑了三个小时 在EB里面染色10 min 清水洗后成像。
发卡结构退火温度是90度 5min  不应该二聚体形成啊？怎么减少二聚体呢   急求~~谢谢大家了

20121226-2.jpg



[ Last edited by 无形居士2009 on 2012-12-27 at 16:40 ]
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1楼 2012-12-27 09:49:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ccharlien

木虫 (正式写手)
扫胶的时候把焦距调准啊 看的都晕了...
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4楼2012-12-29 22:48:41
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普通回帖

greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-30 08:57:32
条带跑散和凝胶的配制经常有很大关系。

尝试稍微增大凝胶浓度、降低电压试试。
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2楼2012-12-29 11:14:00
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121however

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-30 08:57:25
跑胶的时候注意一下温度不要过高，另外降低电压，增大教的浓度试试
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3楼2012-12-29 20:49:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
无形居士2009: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-30 08:57:00
建议上个marker，便于判断是样品的问题还是胶的问题。
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5楼2012-12-30 02:59:17
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无形居士2009

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccharlien at 2012-12-29 22:48:41
扫胶的时候把焦距调准啊 看的都晕了...

我都是自动聚焦  我也觉得成的像不好看  怎么自己调焦距啊
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6楼2012-12-30 08:55:13
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无形居士2009

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by greeneese at 2012-12-29 11:14:00
条带跑散和凝胶的配制经常有很大关系。

尝试稍微增大凝胶浓度、降低电压试试。

一般跑胶时的温度是多少啊？电压你们保持多少啊？我这是10%的胶 跑的DNA是  100个base和50base
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7楼2012-12-30 08:56:26
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无形居士2009

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-30 02:59:17
建议上个marker，便于判断是样品的问题还是胶的问题。

恩  我试试 谢谢
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8楼2012-12-30 08:56:51
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 无形居士2009 at 2012-12-30 08:56:26
一般跑胶时的温度是多少啊？电压你们保持多少啊？我这是10%的胶 跑的DNA是  100个base和50base...

温度我们一般不严格控制，但电泳的一般原则是温度不宜过高，大型的电泳槽一般都要通冷却水带走电泳过程中产生的热量。电压也不会有固定值，根据上一次用的电压和电泳的结果调整，比如某条件下电泳条带弥散就要降低电压。
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9楼2012-12-30 10:50:22
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
无形居士2009: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-01-12 09:05:27
1、可以试试银染，效果应该比EB好。
2、PAGE跑DNA的话，要用循环水降温啊，不然会扩散厉害。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
10楼2012-12-30 13:27:56
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