应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教下RT-PCR空白对照为啥总有反应峰？
91/1返回列表
查看: 2236  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chengx1121

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教下RT-PCR空白对照为啥总有反应峰？

最近补实验空白对照总有反应峰，CT值跟正常样本都差不多，25上下就起峰了
看了下溶解峰，漂亮的很，连引物二聚体的影子都没有
我这是什么情况啊，该咋解决啊？

顺便再问下，各位读取CT值的基线一般怎么选啊？是默认还是自己调整？

这是我最近做的空白

这是溶解曲线



[ Last edited by chengx1121 on 2012-12-17 at 17:53 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-17 17:51:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
熔解曲线温度在80度以下的一般是引物二聚体。正常的峰在85度上下。此外，你的熔解曲线很乱啊。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-18 07:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的扩增曲线有点晚！熔解曲线有些乱！你用的是什么扩增试剂盒，哪家公司的？我们以前也出现过这种情况，我们解决的办法是直接换掉关键的东西。后来试剂盒（扩增）也换了。结果就漂亮很多！
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-18 09:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengx1121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-18 07:39:02
熔解曲线温度在80度以下的一般是引物二聚体。正常的峰在85度上下。此外，你的熔解曲线很乱啊。

问题是这个曲线是空白对照啊……昨天做了几个空白，扩增曲线和溶解曲线还有更漂亮的，我不好意思帖出来……
试剂换了一个遍，空白还是会出现反应
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-18 13:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengx1121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-18 09:28:25
你的扩增曲线有点晚！熔解曲线有些乱！你用的是什么扩增试剂盒，哪家公司的？我们以前也出现过这种情况，我们解决的办法是直接换掉关键的东西。后来试剂盒（扩增）也换了。结果就漂亮很多！

图是空白对照，理论上应该更晚出现或者根本不出现，这峰太漂亮了，郁闷的难受啊！
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-18 13:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by chengx1121 at 2012-12-18 13:02:16
问题是这个曲线是空白对照啊……昨天做了几个空白，扩增曲线和溶解曲线还有更漂亮的，我不好意思帖出来……
试剂换了一个遍，空白还是会出现反应...

空白对照有扩增并且溶解曲线峰在80度以下一般是引物二聚体了。可能是引物设计不是很好。
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-18 13:37:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这么多曲线，哪个是空白的呢？还是都是啊？
你这个空白曾经有过这种情况么？
如果是第一次做就出现这种情况，可以说引物设计得很差。
当然还有一种可能，就是你的实验室曾经有人使用过相同的引物进行扩增，然后他跑过电泳或开过管，导致你的实验室大环境被污染，而造成空白出现扩增
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-18 17:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengx1121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by txw87 at 2012-12-18 17:22:36
你这么多曲线，哪个是空白的呢？还是都是啊？
你这个空白曾经有过这种情况么？
如果是第一次做就出现这种情况，可以说引物设计得很差。
当然还有一种可能，就是你的实验室曾经有人使用过相同的引物进行扩增，然后 ...

都是空白，目前看，好像我的试剂污染了，别人在其他实验室做完全没有曲线试剂一样
赞一下 回复此楼
8楼2012-12-20 10:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是跑的内参的溶解曲线？如果内参的话是正常的，若不是内参的，很可能是你的目的基因未扩增出来，你设计的引物是有问题的，很可能是跟你的反转录试剂如oligodT或者是其他东西反应了
赞一下 回复此楼
9楼2012-12-20 11:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chengx1121 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭！
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭