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chengx1121

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教下RT-PCR空白对照为啥总有反应峰?

最近补实验空白对照总有反应峰,CT值跟正常样本都差不多,25上下就起峰了
看了下溶解峰,漂亮的很,连引物二聚体的影子都没有
我这是什么情况啊,该咋解决啊?

顺便再问下,各位读取CT值的基线一般怎么选啊?是默认还是自己调整?

这是我最近做的空白

这是溶解曲线



[ Last edited by chengx1121 on 2012-12-17 at 17:53 ]
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chengx1121

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-18 07:39:02
熔解曲线温度在80度以下的一般是引物二聚体。正常的峰在85度上下。此外,你的熔解曲线很乱啊。

问题是这个曲线是空白对照啊……昨天做了几个空白,扩增曲线和溶解曲线还有更漂亮的,我不好意思帖出来……
试剂换了一个遍,空白还是会出现反应
4楼2012-12-18 13:02:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
熔解曲线温度在80度以下的一般是引物二聚体。正常的峰在85度上下。此外,你的熔解曲线很乱啊。
2楼2012-12-18 07:39:02
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的扩增曲线有点晚!熔解曲线有些乱!你用的是什么扩增试剂盒,哪家公司的?我们以前也出现过这种情况,我们解决的办法是直接换掉关键的东西。后来试剂盒(扩增)也换了。结果就漂亮很多!
3楼2012-12-18 09:28:25
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chengx1121

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-18 09:28:25
你的扩增曲线有点晚!熔解曲线有些乱!你用的是什么扩增试剂盒,哪家公司的?我们以前也出现过这种情况,我们解决的办法是直接换掉关键的东西。后来试剂盒(扩增)也换了。结果就漂亮很多!

图是空白对照,理论上应该更晚出现或者根本不出现,这峰太漂亮了,郁闷的难受啊!
5楼2012-12-18 13:03:27
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