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honey倩

铜虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌质粒提取出现了一些问题

做克隆的,连接载体转化到乳酸菌之后,提取质粒验证,现在就是说什么也提不出东西来了,(我们是先加一定的溶菌酶的溶液I溶液处理之后,再加溶液II溶液III,然后再醇沉),醇沉之后离心发现EP管底部会有白色的东西量也不少,晾干加水溶解之后,直接跑电泳一条带也没有,只有最下边挺亮的一片,大概就是RNA了,现在就是不知道是哪里出了问题了,现在所用的试剂都重新换了,还是这个问题,很是郁闷
请教一下各位,大家提取乳酸菌的质粒是用什么方法,之前按照《乳酸菌天然质粒提取方法的优化》中的方法做过也没做出来,就一直按照我们的方法做了,现在又出现问题了,还真是挺犯愁的,希望大家帮帮忙
我想做验证,做菌落PCR这个假阳性就是太高还是不行,还是得提…
下边那个图就是提的情况,靠近maker那个泳道应该就是提出来的了,也是之前提的

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huoquanlike

新虫 (初入文坛)

将连接产物转化到合适的大肠杆菌里吧!提取质粒,酶切鉴定,测序,再转入到乳酸菌。我之前做也是提不出质粒在乳酸菌里。或者你可以把在乳酸菌里提取出质粒转入到大肠杆菌中。因为可能这个质粒在乳酸菌里是低拷贝的!祝你好运!
3楼2015-07-03 17:13:34
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紫剑_woniu

新虫 (初入文坛)

请问楼主的问题解决了吗
2楼2013-05-03 16:00:11
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郭玉肖

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huoquanlike at 2015-07-03 17:13:34
将连接产物转化到合适的大肠杆菌里吧!提取质粒,酶切鉴定,测序,再转入到乳酸菌。我之前做也是提不出质粒在乳酸菌里。或者你可以把在乳酸菌里提取出质粒转入到大肠杆菌中。因为可能这个质粒在乳酸菌里是低拷贝的! ...

请问你提取乳酸菌质粒时溶菌酶用什么缓冲液溶的呢?
4楼2017-07-25 21:34:39
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灰灰,加油!

新虫 (小有名气)

你好,你的问题怎么解决的
5楼2017-09-05 20:34:04
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