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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 融合pcr最后一步
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

[求助] 融合pcr最后一步

最近做融合，最后一步加入首尾引物一直没p出来，设计了一对内引物也一样，求高人指点

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1楼 2012-12-02 00:09:12
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oyjz12

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试验时注意引物的使用，防止交叉！
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2楼2012-12-02 00:23:14
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
作为模板的pcr产物衔接片段多长？模板浓度，退火温度注意一下。这些比较重要。

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3楼2012-12-02 08:10:39
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度很重要，最好把你的引物都发过来看看，还有你的PCR条件都发过来，这样才好分析。
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4楼2012-12-02 12:31:46
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-02 08:10:39
作为模板的pcr产物衔接片段多长？模板浓度，退火温度注意一下。这些比较重要。

中间产物有p出来，就是用中间产物为模板加首尾引物p不出来

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5楼2012-12-02 23:57:26
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangqi20092 at 2012-12-02 12:31:46
退火温度很重要，最好把你的引物都发过来看看，还有你的PCR条件都发过来，这样才好分析。

我用降落p的，其实最后一步就是一个二次pcr,按理说没那么难啊

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6楼2012-12-02 23:59:37
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by catmihzh at 2012-12-02 23:57:26
中间产物有p出来，就是用中间产物为模板加首尾引物p不出来
...

我们都不再扩增了，浓度不够可以加几个循环吧。

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7楼2012-12-03 18:51:29
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两条DNA链之间交叉的区域有多长？
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jiayoubashaonian
8楼2012-12-03 20:55:16
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长
引用回帖:
8楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-12-03 20:55:16
两条DNA链之间交叉的区域有多长？

20bp，融合有成功啊，就是最后一步加首尾引物没p出来

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9楼2012-12-04 00:17:38
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