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幸福家宜

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 感受态细胞污染的问题

我做大肠杆菌的感受态，做好之后，涂了一块LA的平板，但是第二天长了一平板，按说感受态细胞是不能生长的啊。难道是我做的感受态细胞污染了？求教于大家，谢谢！
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1楼 2012-11-30 09:02:27
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foxcl

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 幸福家宜 at 2012-12-03 09:22:36
你们很豪放的说。...

因为我们做完转化后，会PCR及酶切验证。一般多挑3个克隆子。现在没出现过什么问题啊。
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9楼2012-12-04 08:53:52
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kingleo99

木虫 (小有名气)
★ ★
幸福家宜(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-30 11:44:32
感受态为什么不能生长？如果你的平板里面没有加抗生素，感受态是可以生长的。如果加了抗生素还长说明你的大肠杆菌变异了，理论上说只有有氨苄抗性质粒的大肠杆菌（也就是转化子）才能生长。
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2楼2012-11-30 11:01:09
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czdaeq

铜虫 (著名写手)
★
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-30 11:44:58
感受态做完，俺一般不急着验证。只是在转化之前（比如amp抗性），我涂一个感受态到amp板——涨了就说明染有amp抗性，没长就ok；下次做kan抗性的时候，再涂一个感受态到kan平板上，验证下感受态有没有染kan抗性的；.....；
反正每次转化的同时，都会加对照，已验证俺的感受态没有问题。
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4楼2012-11-30 11:18:52
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
幸福家宜(金币+1): 谢谢参与
如果平板没有加抗生素，那么感受态是会生长的，其实也就是细菌生长而已。
如果平板有加抗生素，那么感受态应该不能生长。如果长了，1.抗生素失效，2.平板有问题，曾试过抗生素没失效但是倒平板的时候过热加入抗生素或照了紫外，可能会导致平板失去筛选功能。3. 感受态被污染，可能是制备过程中污染，可能是菌株污染，只需要在有效的抗性平板上划板看感受态长不长就能找出原因。
我一般都是制备完感受态马上就用不同的抗性平板来检验感受态的有效性，因为一般做克隆都是一天十来个，如果到时候再检验，出问题就白费工夫了。
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5楼2012-11-30 14:19:48
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