应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr实验相关
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
231/3返回列表123下一页
查看: 1383  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] pcr实验相关

我想从青霉里面克隆菊粉酶基因，之前退火在42度的时候做出来过，但是觉得条带浅没有回收，但是不知道为什么后来重复了几百组实验都没有在做出来过。引物的Tm值是51.65，我从40到60度来来回回的试了很多遍了。为什么会做不出来了呢？麻烦大家江湖急救一下，给的指导吧。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
有今生没来世，且行且珍惜。
1楼 2012-11-28 22:35:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是模板问题，不纯或者是降解了也可能是引物降解了，如果重新制备模板和稀释引物后还p不出来，建议尝试降落pcr

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
[url=http://weibo.com/2152924384?s=6uyXnP][img]http://service.t.sina.com.cn/widget/qmd/2152924384/13d43368/7.png[/img][/url]
2楼2012-11-29 00:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
再就是增加循环数，用好的酶
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-29 05:06:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况，果断重新设计引物。类似情况多次发生在我们实验室，引物不够特异或质量不好很容易造成这种情况
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-29 08:54:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
别摸；了 ，就是引物不好使呗，重新设计引物
赞一下 回复此楼
很给力
5楼2012-11-29 11:09:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by catmihzh at 2012-11-29 00:23:34
可能是模板问题，不纯或者是降解了也可能是引物降解了，如果重新制备模板和稀释引物后还p不出来，建议尝试降落pcr

我也怀疑引物被降解或污染了，所以我重新合成的引物，依旧没有做出来。我提的基因组浓度蛮高的，最近我又跑电泳试了一下，是有一点降解。我现在尝试稀释一百倍后的效果，不知道会怎样。我没有做过降落pcr，能不能麻烦你给我说一下降落pcr具体步骤，麻烦你了。。。
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
6楼2012-11-29 17:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bloodwar at 2012-11-29 05:06:16
再就是增加循环数，用好的酶

我用的takara的酶，应该还过去的吧？！我现在没有p出条带来，增加循环会好使吗？
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
7楼2012-11-29 17:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2012-11-29 08:54:21
这种情况，果断重新设计引物。类似情况多次发生在我们实验室，引物不够特异或质量不好很容易造成这种情况

我也怀疑是引物问题。但是我是从一个罕见的青霉中克隆基因的，目前都没有对这种青霉官方命名，更没有确定的序列，是通过筛选和测酶活确定产酶的。这种情况下设计引物，几乎等于从未知序列中提取未知基因，师兄从基因库里找的的青霉属的菊粉酶基因设计的一对引物，计划p出1500左右的片段。好有压力啊。。。。
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
8楼2012-11-29 18:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlk at 2012-11-29 11:09:33
别摸；了 ，就是引物不好使呗，重新设计引物

我是从一个罕见的青霉中克隆基因的，目前都没有对这种青霉官方命名，更没有确定的序列，是通过筛选和测酶活确定产酶的。这种情况下设计引物，几乎等于从未知序列中提取未知基因，有什么好的建议吗？
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
9楼2012-11-29 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunlk

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Cllair at 2012-11-29 18:09:41
我是从一个罕见的青霉中克隆基因的，目前都没有对这种青霉官方命名，更没有确定的序列，是通过筛选和测酶活确定产酶的。这种情况下设计引物，几乎等于从未知序列中提取未知基因，有什么好的建议吗？...

blast搜索下，看看有没有同源序列
赞一下 回复此楼
很给力
10楼2012-11-29 19:30:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Cllair 的主题更新
231/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学354求调剂 +13 101次希望 2026-03-28 13/650 2026-03-31 13:38 by anny19840123
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +5 美味可乐鸡翅 2026-03-26 5/250 2026-03-31 11:56 by sophie2180
[考研] 276求调剂 +3 赵久华 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-29 3/150 2026-03-31 10:06 by cal0306
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[基金申请] 面上5B能上会吗？ +7 redcom 2026-03-29 7/350 2026-03-30 12:44 by 爱搞研究的小孩
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭