24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1398  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] pcr实验相关

我想从青霉里面克隆菊粉酶基因,之前退火在42度的时候做出来过,但是觉得条带浅没有回收,但是不知道为什么后来重复了几百组实验都没有在做出来过。引物的Tm值是51.65,我从40到60度来来回回的试了很多遍了。为什么会做不出来了呢?麻烦大家江湖急救一下,给的指导吧。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

有今生没来世,且行且珍惜。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlk at 2012-11-29 11:09:33
别摸;了 ,就是引物不好使呗,重新设计引物

我是从一个罕见的青霉中克隆基因的,目前都没有对这种青霉官方命名,更没有确定的序列,是通过筛选和测酶活确定产酶的。这种情况下设计引物,几乎等于从未知序列中提取未知基因,有什么好的建议吗?
有今生没来世,且行且珍惜。
9楼2012-11-29 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是模板问题,不纯或者是降解了也可能是引物降解了,如果重新制备模板和稀释引物后还p不出来,建议尝试降落pcr

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
[url=http://weibo.com/2152924384?s=6uyXnP][img]http://service.t.sina.com.cn/widget/qmd/2152924384/13d43368/7.png[/img][/url]
2楼2012-11-29 00:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
再就是增加循环数,用好的酶
3楼2012-11-29 05:06:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况,果断重新设计引物。类似情况多次发生在我们实验室,引物不够特异或质量不好很容易造成这种情况
4楼2012-11-29 08:54:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +8 Doleres 2026-03-31 8/400 2026-03-31 19:09 by Wang200018
[考研] 284求调剂 +9 小熊~~ 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:22 by 253863592
[考研] 290分调剂求助 +10 吉祥止止陈 2026-03-25 10/500 2026-03-31 17:54 by 544594351
[考研] 070300一志愿211,312分求调剂院校 +12 小黄鸭宝 2026-03-30 12/600 2026-03-31 17:53 by 544594351
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 285求调剂 +3 FZAC123 2026-03-30 3/150 2026-03-31 17:49 by 热情沙漠
[考研] 调剂310 +13 温柔的晚安 2026-03-25 14/700 2026-03-31 13:03 by 记事本2026
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 282求调剂 +3 呼吸都是减肥 2026-03-31 3/150 2026-03-31 10:00 by wangjy2002
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-30 5/250 2026-03-31 09:41 by zhshch
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +25 稻妻小编 2026-03-26 25/1250 2026-03-30 20:11 by 滴滴上岸呀
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 考研调剂 +10 呼呼?~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
信息提示
请填处理意见