24小时热门版块排行榜    

查看: 1529  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] pcr实验相关

我想从青霉里面克隆菊粉酶基因,之前退火在42度的时候做出来过,但是觉得条带浅没有回收,但是不知道为什么后来重复了几百组实验都没有在做出来过。引物的Tm值是51.65,我从40到60度来来回回的试了很多遍了。为什么会做不出来了呢?麻烦大家江湖急救一下,给的指导吧。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

有今生没来世,且行且珍惜。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sunlk at 2012-11-29 11:09:33
别摸;了 ,就是引物不好使呗,重新设计引物

我是从一个罕见的青霉中克隆基因的,目前都没有对这种青霉官方命名,更没有确定的序列,是通过筛选和测酶活确定产酶的。这种情况下设计引物,几乎等于从未知序列中提取未知基因,有什么好的建议吗?
有今生没来世,且行且珍惜。
9楼2012-11-29 18:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是模板问题,不纯或者是降解了也可能是引物降解了,如果重新制备模板和稀释引物后还p不出来,建议尝试降落pcr

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
[url=http://weibo.com/2152924384?s=6uyXnP][img]http://service.t.sina.com.cn/widget/qmd/2152924384/13d43368/7.png[/img][/url]
2楼2012-11-29 00:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
再就是增加循环数,用好的酶
3楼2012-11-29 05:06:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种情况,果断重新设计引物。类似情况多次发生在我们实验室,引物不够特异或质量不好很容易造成这种情况
4楼2012-11-29 08:54:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 4/200 2026-09-01 06:38 by o3EMxHUAQDtS
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 06:06 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:56 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见