24小时热门版块排行榜    

查看: 2997  |  回复: 25
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR多条带,还能往后做双酶切吗

如题,我克隆之后的菌落PCR多条带,包含目的条带,请问往后做提质粒、双酶切、连接表达载体会不会有影响呀?本人第一次做,希望高手帮助,O(∩_∩)O谢谢!
图中右侧是我的其中一个基因,目的条带500多bp,就是最亮的那条。我是用自己设计的特异性引物进行PCR的。

2012-11-19 2+3_副本.jpg

[ Last edited by fayzhao on 2012-11-28 at 10:35 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
fayzhao: 金币+1, 谢谢 2012-11-29 09:13:08
没有很理解,为啥要反向互补才是你的呢,不过在测序结果上做应该没什么问题,因为测序也都是机器操作,选择可信的测序公司比较关键

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2012-11-29 00:04:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
fayzhao: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-11-28 15:41:30
可以,你酶切鉴定下,因为500bp相对来说比较小,用自己设计的引物很容易扩出来假阳性或者其他条带的,你酶切鉴定下,确定自己已经连上了,再做后续工作哈
2楼2012-11-28 15:27:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-28 15:27:01
可以,你酶切鉴定下,因为500bp相对来说比较小,用自己设计的引物很容易扩出来假阳性或者其他条带的,你酶切鉴定下,确定自己已经连上了,再做后续工作哈

我拿菌液测序了,但是测出来的序列需要反向互补才是我的序列……这样的话对后面的实验有没有影响呢?
3楼2012-11-28 15:43:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

fayzhao: 回帖置顶 2012-11-28 15:51:23
补充:我已经将菌液测序了,但是测序结果需要反向互补才是目的基因序列。这样对后续实验有没有影响呢?
4楼2012-11-28 15:51:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +10 xqy2009 2026-10-13 12/600 2026-10-15 19:24 by lpwang
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见