24小时热门版块排行榜    

查看: 2411  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)

[求助] DNA含量多少才能在琼脂糖凝胶上显示出亮带

想问下各位大虾,DNA要上多少量才能在琼脂糖上显示出亮带啊。看marker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了,可是我的总dna用核酸测定仪测出来是110ng/ul,伤了5ul有550ng怎么跑电泳都没见到亮带呢,想问下有哪些因素会影响亮带的显现,另外做过的一般上了多少含量的dna呢,希望各位有经验的大虾指点啊,感激不尽
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 07:23:41
你的DNA的分子量多少?不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以,想要从胶上参照marker定浓度的话,需要参比分子量接近的条带。此外,正如2L说的,RNA的存在会影响DNA的定量。

由于是总菌dna,至少在2000bp以上吧,因为我没看到亮带所以也不确定它的分子量,有rna污染的话跑胶时应该在胶上有现象吧
5楼2012-11-27 15:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-27 16:45:54
scelab: 金币+6, xxjl 2012-11-29 14:03:23
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA,不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐?
2、一般电泳时,还会加loading dye 并且用量比较随意(严格来看,似乎要求DNA 5 ul:1 ul loading dye),所以电泳跑胶只能大概估计浓度,不知道楼主有么有考虑这点?
3、我们这边用得3K的marker,1、3、5k为亮条带,貌似认为是10ng/ul的量(这个一时也记不太清),所以应该不用太高的浓度就可以看见的,楼主还是看看电泳以前的步骤有么有问题吧
2楼2012-11-26 20:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-27 16:51:21
你的DNA的分子量多少?不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以,想要从胶上参照marker定浓度的话,需要参比分子量接近的条带。此外,正如2L说的,RNA的存在会影响DNA的定量。
3楼2012-11-27 07:23:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-26 20:49:59
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA,不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐?
2、一般电泳时,还会加loading dye 并且用量比较随意(严格来看,似乎要求DNA 5 ul:1 ul loading dye),所以电泳跑胶只能大概估 ...

用了rna酶的,上次rna酶用的不够,所以跑出来在100bp下面有拖带,后面改进了多加了些,拖带不见了,但是板上什么也没有,整个胶上有弥漫一点一点的小亮点,不知道是怎么回事,拍了照,但是由于像素不高,亮点在照片上显示不出来,我没加样的涌到也出现一些小亮点,不知道是不是缓冲液用久了的原因,但marker是跑出来了,样本dna是总细菌,应该大于2000bp,我有加loadingbuffer的,就是感觉核酸测定仪测了有这么高的dna含量,可就不知道为什么跑不出来,我扩增一次也看不到亮带,第二轮扩增才看到亮带
4楼2012-11-27 15:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 11/550 2026-03-19 08:11 by 脱颖而出
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +7 Liwangman 2026-03-15 7/350 2026-03-18 20:08 by walc
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见