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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DNA含量多少才能在琼脂糖凝胶上显示出亮带
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胡小喜

新虫 (小有名气)

[求助] DNA含量多少才能在琼脂糖凝胶上显示出亮带

想问下各位大虾，DNA要上多少量才能在琼脂糖上显示出亮带啊。看marker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了，可是我的总dna用核酸测定仪测出来是110ng/ul，伤了5ul有550ng怎么跑电泳都没见到亮带呢，想问下有哪些因素会影响亮带的显现，另外做过的一般上了多少含量的dna呢，希望各位有经验的大虾指点啊，感激不尽
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1楼 2012-11-26 19:17:43
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胡小喜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-26 20:49:59
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA，不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐？
2、一般电泳时，还会加loading dye 并且用量比较随意（严格来看，似乎要求DNA 5 ul：1 ul loading dye），所以电泳跑胶只能大概估 ...

用了rna酶的，上次rna酶用的不够，所以跑出来在100bp下面有拖带，后面改进了多加了些，拖带不见了，但是板上什么也没有，整个胶上有弥漫一点一点的小亮点，不知道是怎么回事，拍了照，但是由于像素不高，亮点在照片上显示不出来，我没加样的涌到也出现一些小亮点，不知道是不是缓冲液用久了的原因，但marker是跑出来了，样本dna是总细菌，应该大于2000bp，我有加loadingbuffer的，就是感觉核酸测定仪测了有这么高的dna含量，可就不知道为什么跑不出来，我扩增一次也看不到亮带，第二轮扩增才看到亮带
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4楼2012-11-27 15:19:44
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czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-27 16:45:54
scelab: 金币+6, xxjl 2012-11-29 14:03:23
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA，不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐？
2、一般电泳时，还会加loading dye 并且用量比较随意（严格来看，似乎要求DNA 5 ul：1 ul loading dye），所以电泳跑胶只能大概估计浓度，不知道楼主有么有考虑这点？
3、我们这边用得3K的marker，1、3、5k为亮条带，貌似认为是10ng/ul的量（这个一时也记不太清），所以应该不用太高的浓度就可以看见的，楼主还是看看电泳以前的步骤有么有问题吧
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2楼2012-11-26 20:49:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-27 16:51:21
你的DNA的分子量多少？不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以，想要从胶上参照marker定浓度的话，需要参比分子量接近的条带。此外，正如2L说的，RNA的存在会影响DNA的定量。
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3楼2012-11-27 07:23:41
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胡小喜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 07:23:41
你的DNA的分子量多少？不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以，想要从胶上参照marker定浓度的话，需要参比分子量接近的条带。此外，正如2L说的，RNA的存在会影响DNA的定量。

由于是总菌dna，至少在2000bp以上吧，因为我没看到亮带所以也不确定它的分子量，有rna污染的话跑胶时应该在胶上有现象吧
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5楼2012-11-27 15:21:42
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