24小时热门版块排行榜    

查看: 2393  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)

[求助] DNA含量多少才能在琼脂糖凝胶上显示出亮带

想问下各位大虾,DNA要上多少量才能在琼脂糖上显示出亮带啊。看marker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了,可是我的总dna用核酸测定仪测出来是110ng/ul,伤了5ul有550ng怎么跑电泳都没见到亮带呢,想问下有哪些因素会影响亮带的显现,另外做过的一般上了多少含量的dna呢,希望各位有经验的大虾指点啊,感激不尽
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-26 20:49:59
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA,不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐?
2、一般电泳时,还会加loading dye 并且用量比较随意(严格来看,似乎要求DNA 5 ul:1 ul loading dye),所以电泳跑胶只能大概估 ...

用了rna酶的,上次rna酶用的不够,所以跑出来在100bp下面有拖带,后面改进了多加了些,拖带不见了,但是板上什么也没有,整个胶上有弥漫一点一点的小亮点,不知道是怎么回事,拍了照,但是由于像素不高,亮点在照片上显示不出来,我没加样的涌到也出现一些小亮点,不知道是不是缓冲液用久了的原因,但marker是跑出来了,样本dna是总细菌,应该大于2000bp,我有加loadingbuffer的,就是感觉核酸测定仪测了有这么高的dna含量,可就不知道为什么跑不出来,我扩增一次也看不到亮带,第二轮扩增才看到亮带
4楼2012-11-27 15:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-27 16:45:54
scelab: 金币+6, xxjl 2012-11-29 14:03:23
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA,不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐?
2、一般电泳时,还会加loading dye 并且用量比较随意(严格来看,似乎要求DNA 5 ul:1 ul loading dye),所以电泳跑胶只能大概估计浓度,不知道楼主有么有考虑这点?
3、我们这边用得3K的marker,1、3、5k为亮条带,貌似认为是10ng/ul的量(这个一时也记不太清),所以应该不用太高的浓度就可以看见的,楼主还是看看电泳以前的步骤有么有问题吧
2楼2012-11-26 20:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助 2012-11-27 16:51:21
你的DNA的分子量多少?不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以,想要从胶上参照marker定浓度的话,需要参比分子量接近的条带。此外,正如2L说的,RNA的存在会影响DNA的定量。
3楼2012-11-27 07:23:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡小喜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 07:23:41
你的DNA的分子量多少?不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以,想要从胶上参照marker定浓度的话,需要参比分子量接近的条带。此外,正如2L说的,RNA的存在会影响DNA的定量。

由于是总菌dna,至少在2000bp以上吧,因为我没看到亮带所以也不确定它的分子量,有rna污染的话跑胶时应该在胶上有现象吧
5楼2012-11-27 15:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 9/450 2026-03-17 10:29 by xujiaoszu
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
请填处理意见