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胡小喜

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[求助] DNA含量多少才能在琼脂糖凝胶上显示出亮带

想问下各位大虾，DNA要上多少量才能在琼脂糖上显示出亮带啊。看marker中最亮的750bp的dna50ng就很亮了，可是我的总dna用核酸测定仪测出来是110ng/ul，伤了5ul有550ng怎么跑电泳都没见到亮带呢，想问下有哪些因素会影响亮带的显现，另外做过的一般上了多少含量的dna呢，希望各位有经验的大虾指点啊，感激不尽

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1楼 2012-11-26 19:17:43

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2楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-26 20:49:59
1、核酸检测仪既可以检测DNA也可以检测RNA，不知道楼主的DNA有没有用RNA酶消化呐？
2、一般电泳时，还会加loading dye 并且用量比较随意（严格来看，似乎要求DNA 5 ul：1 ul loading dye），所以电泳跑胶只能大概估 ...

用了rna酶的，上次rna酶用的不够，所以跑出来在100bp下面有拖带，后面改进了多加了些，拖带不见了，但是板上什么也没有，整个胶上有弥漫一点一点的小亮点，不知道是怎么回事，拍了照，但是由于像素不高，亮点在照片上显示不出来，我没加样的涌到也出现一些小亮点，不知道是不是缓冲液用久了的原因，但marker是跑出来了，样本dna是总细菌，应该大于2000bp，我有加loadingbuffer的，就是感觉核酸测定仪测了有这么高的dna含量，可就不知道为什么跑不出来，我扩增一次也看不到亮带，第二轮扩增才看到亮带

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4楼2012-11-27 15:19:44

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3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 07:23:41
你的DNA的分子量多少？不同大小的DNA上同样量在眼睛看起来亮度是不完全一样的。所以，想要从胶上参照marker定浓度的话，需要参比分子量接近的条带。此外，正如2L说的，RNA的存在会影响DNA的定量。

由于是总菌dna，至少在2000bp以上吧，因为我没看到亮带所以也不确定它的分子量，有rna污染的话跑胶时应该在胶上有现象吧

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5楼2012-11-27 15:21:42

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10楼: Originally posted by kiruwa at 2012-11-28 08:55:35
看了你前面的帖子，发现你们似乎用的是更加老式的机器，那结果就更不可信了。Nanodrop有时会给出特别漂亮的260/280比值，但是一个教授说样品中含有大量蛋白质？？也会给出这样的比值（原话不太记得了，如果有误请谅 ...

额，我们没那东西

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11楼2012-11-29 09:43:01

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