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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

[求助] 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？ 已有1人参与

最近一直提取的植物总DNA总是断裂，使用的是自己配制的溶液，用改良的CTAB法，提取过程已经很小心了，没有剧烈震荡，可是总是提到断裂的DNA 是什么原因呢？下图是我提的DNA 跑的0.8%琼脂糖凝胶电泳！急希望各位虫虫帮忙解答！

IMG_20121123_103631.jpg
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haha
1楼 2012-11-24 17:12:10
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉也有可能是你的组织有降解，因为你这个下面条带太亮了
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下雨的傍晚
5楼2012-11-26 08:59:14
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-26 17:42:39
那怎么防止降解呢？我提了8,9次都差不多是这样的，我该怎么继续下去呢？...

你的组织怎么保存的？-80比较好点
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10楼2012-11-26 22:33:58
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-27 09:21:17
有时是新采的，有时是在-20度保持一天或两天的《不过一直都是用的成熟叶片，因为现在没有嫩叶！...

但是小片段挺多，你试试RNA酶消化一下
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16楼2012-11-27 11:46:17
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在提取的时候有一步是要加RNAse的
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21楼2012-11-27 19:11:56
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 15:59:45
用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀，用RNA酶消解后就看不到沉淀了，是怎么回事啊？我沉淀的方法是，风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解，55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次，12000r/min,10min ...

那你提完之后看呢，有没有条带？应该不会没有条带的
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25楼2012-11-28 18:04:05
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
26楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 18:30:59
没有，就是管子里什么都没有啊...

你的DNA量也太低了吧，不至于用RNase消化之后就什么都没有了吧？你再仔细检查一下你的步骤或者试剂吧
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27楼2012-11-28 20:52:11
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
30楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-29 09:27:20
不知道，今天跑了电泳，没有条带！郁闷啊！...

增加一下你的样品量试试，每次都这样吗？
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32楼2012-11-29 11:32:57
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得你这个很奇怪，应该不会加了RNase就消化没了，有点离谱，我从来没遇到过这种情况，你检查一下试剂或步骤吧，或者看看实验室其他人做的如何
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34楼2012-11-29 13:56:06
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