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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在提取的时候有一步是要加RNAse的
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21楼2012-11-27 19:11:56
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fddyn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知lz 0.8%的琼脂糖跑了多长时间，我一般120V跑三四十分钟的话，总dna应该是上面偏暗的那条带，而下面那条可能是rna
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22楼2012-11-27 21:22:05
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-27 19:11:56
在提取的时候有一步是要加RNAse的

用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀，用RNA酶消解后就看不到沉淀了，是怎么回事啊？我沉淀的方法是，风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解，55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次，12000r/min,10min,再加1/3体积异丙醇及2倍体积无水乙醇（均预冷）沉淀-20度放置30min看不到沉淀，离心后还是没有，怎么办？
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haha
23楼2012-11-28 15:59:45
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by fddyn at 2012-11-27 21:22:05
不知lz 0.8%的琼脂糖跑了多长时间，我一般120V跑三四十分钟的话，总dna应该是上面偏暗的那条带，而下面那条可能是rna

90V，40min 左右。
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haha
24楼2012-11-28 16:29:07
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 15:59:45
用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀，用RNA酶消解后就看不到沉淀了，是怎么回事啊？我沉淀的方法是，风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解，55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次，12000r/min,10min ...

那你提完之后看呢，有没有条带？应该不会没有条带的
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25楼2012-11-28 18:04:05
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-28 18:04:05
那你提完之后看呢，有没有条带？应该不会没有条带的...

没有，就是管子里什么都没有啊
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haha
26楼2012-11-28 18:30:59
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
26楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 18:30:59
没有，就是管子里什么都没有啊...

你的DNA量也太低了吧，不至于用RNase消化之后就什么都没有了吧？你再仔细检查一下你的步骤或者试剂吧
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27楼2012-11-28 20:52:11
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西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好
引用回帖:
15楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-27 11:12:02
是的，含糖和酚较多，所以我把CTAB的量加到3%,4%，PVP2%，巯基乙醇2%，研磨这块我没有液氮只能在冰上磨，磨得挺细的了！试剂盒，没试过不过问过人家都说还是CTAB法比较好用。...

没有液氮啊？能不能问其他人要一点？组织液化的话核酸降解很厉害的。
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快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
28楼2012-11-28 22:41:09
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DNA要降解也不容易啊，估计就是RNA没除干净
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29楼2012-11-29 05:13:54
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-28 20:52:11
你的DNA量也太低了吧，不至于用RNase消化之后就什么都没有了吧？你再仔细检查一下你的步骤或者试剂吧...

不知道，今天跑了电泳，没有条带！郁闷啊！
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haha
30楼2012-11-29 09:27:20
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