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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

在提取的时候有一步是要加RNAse的
21楼2012-11-27 19:11:56
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fddyn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知lz 0.8%的琼脂糖跑了多长时间,我一般120V跑三四十分钟的话,总dna应该是上面偏暗的那条带,而下面那条可能是rna
22楼2012-11-27 21:22:05
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-27 19:11:56
在提取的时候有一步是要加RNAse的

用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀,用RNA酶消解后就看不到沉淀了,是怎么回事啊?我沉淀的方法是,风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解,55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次,12000r/min,10min,再加1/3体积异丙醇及2倍体积无水乙醇(均预冷)沉淀-20度放置30min看不到沉淀,离心后还是没有,怎么办?
haha
23楼2012-11-28 15:59:45
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by fddyn at 2012-11-27 21:22:05
不知lz 0.8%的琼脂糖跑了多长时间,我一般120V跑三四十分钟的话,总dna应该是上面偏暗的那条带,而下面那条可能是rna

90V,40min 左右。
haha
24楼2012-11-28 16:29:07
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 15:59:45
用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀,用RNA酶消解后就看不到沉淀了,是怎么回事啊?我沉淀的方法是,风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解,55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次,12000r/min,10min ...

那你提完之后看呢,有没有条带?应该不会没有条带的
25楼2012-11-28 18:04:05
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-28 18:04:05
那你提完之后看呢,有没有条带?应该不会没有条带的...

没有,就是管子里什么都没有啊
haha
26楼2012-11-28 18:30:59
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

引用回帖:
26楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-28 18:30:59
没有,就是管子里什么都没有啊...

你的DNA量也太低了吧,不至于用RNase消化之后就什么都没有了吧?你再仔细检查一下你的步骤或者试剂吧
27楼2012-11-28 20:52:11
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西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

引用回帖:
15楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-27 11:12:02
是的,含糖和酚较多,所以我把CTAB的量加到3%,4%,PVP2%,巯基乙醇2%,研磨这块我没有液氮只能在冰上磨,磨得挺细的了!试剂盒,没试过不过问过人家都说还是CTAB法比较好用。...

没有液氮啊?能不能问其他人要一点?组织液化的话核酸降解很厉害的。
快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
28楼2012-11-28 22:41:09
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DNA要降解也不容易啊,估计就是RNA没除干净
29楼2012-11-29 05:13:54
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

引用回帖:
27楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-28 20:52:11
你的DNA量也太低了吧,不至于用RNase消化之后就什么都没有了吧?你再仔细检查一下你的步骤或者试剂吧...

不知道,今天跑了电泳,没有条带!郁闷啊!
haha
30楼2012-11-29 09:27:20
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