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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-26 22:02:57
由于当时没有MARKER了，加乙醇的时候能见到絮状沉淀，可是提了两周左右一直都是这样啊！使用CTAB提的枇杷叶DNA，因为后续要做甲基化所以要纯的，但是一会提不好啊！所以帮忙看看啊!...

加乙醇有絮状沉淀说明有DNA，不少，而且片段长度也不算短~
之后溶在水里面还是TE里面？-20还4度保存的？
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11楼2012-11-26 22:51:01
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-26 22:51:01
加乙醇有絮状沉淀说明有DNA，不少，而且片段长度也不算短~
之后溶在水里面还是TE里面？-20还4度保存的？...

TE中溶解的，是4度保存，这是昨天提的结果更差！昨天是加大CTAB裂解液的量为5ml,之前是1ml !帮帮忙啊！

IMG_20121126_165828.jpg
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haha
12楼2012-11-27 09:18:45
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-26 22:33:58
你的组织怎么保存的？-80比较好点...

有时是新采的，有时是在-20度保持一天或两天的《不过一直都是用的成熟叶片，因为现在没有嫩叶！
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haha
13楼2012-11-27 09:21:17
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西农种子

木虫 (著名写手)

青虫还是酱爆的好

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-28 13:37:44
CTAB适用于多数的植物。
枇杷叶的成分里是不是多糖之类的很多？你可以搜索比较下多糖多酚类的植物提取方法。一般来说DNA很容易提取的。
实在不行你用试剂盒试试。总的来说我觉得研磨样品是关键，要足够细，但是不能又不能降解。
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下雨的傍晚
快来粉奶牛的围脖~~http://weibo.com/i/zhaoyuan913
14楼2012-11-27 10:49:10
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by 西农种子 at 2012-11-27 10:49:10
CTAB适用于多数的植物。
枇杷叶的成分里是不是多糖之类的很多？你可以搜索比较下多糖多酚类的植物提取方法。一般来说DNA很容易提取的。
实在不行你用试剂盒试试。总的来说我觉得研磨样品是关键，要足够细，但是不 ...

是的，含糖和酚较多，所以我把CTAB的量加到3%,4%，PVP2%，巯基乙醇2%，研磨这块我没有液氮只能在冰上磨，磨得挺细的了！试剂盒，没试过不过问过人家都说还是CTAB法比较好用。
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haha
15楼2012-11-27 11:12:02
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-27 09:21:17
有时是新采的，有时是在-20度保持一天或两天的《不过一直都是用的成熟叶片，因为现在没有嫩叶！...

但是小片段挺多，你试试RNA酶消化一下
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16楼2012-11-27 11:46:17
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hu6704526

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
琵琶是比较难提取的。建议在提取的过程中利用酚氯仿多抽屉两次，最后溶解DNA的时候加RNA37度处理半个小时。
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17楼2012-11-27 12:23:43
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
对了，你无水乙醇弄出絮状沉淀之后，用牙签或者枪头给挑出来到一管70%乙醇里面洗一下？这样可以排除掉很多非DNA的杂质~
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18楼2012-11-27 14:24:04
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-27 14:24:04
对了，你无水乙醇弄出絮状沉淀之后，用牙签或者枪头给挑出来到一管70%乙醇里面洗一下？这样可以排除掉很多非DNA的杂质~

好的，试一下!谢谢！
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haha
19楼2012-11-27 16:34:12
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-27 11:46:17
但是小片段挺多，你试试RNA酶消化一下...

我的DNA药保存好久，后续操作还要摸索很久，样品多个，加RNA酶的话会影响DNA的稳定吗？
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haha
20楼2012-11-27 16:36:55
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