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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

[求助] 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？ 已有1人参与

最近一直提取的植物总DNA总是断裂，使用的是自己配制的溶液，用改良的CTAB法，提取过程已经很小心了，没有剧烈震荡，可是总是提到断裂的DNA 是什么原因呢？下图是我提的DNA 跑的0.8%琼脂糖凝胶电泳！急希望各位虫虫帮忙解答！

IMG_20121123_103631.jpg
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haha
1楼 2012-11-24 17:12:10
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-28 13:37:19
楼主没见你带marker啊~好歹带个marker看看大概都是多大的片段啊~是不是你沉淀不够彻底哦，感觉大片段量挺少的~你加乙醇沉淀的时候有看到絮状沉淀么？
你提基因组DNA，不断裂是不可能的~不然你说几兆的片段跑出来是什么样子…只能说是断到某个程度比如几十K上百K而已。如果你觉得你的东西断得太厉害了，那有可能是你酚抽振摇的时候太厉害了，或者是SDS处理的时候弄太久了等等原因。一般溶菌酶那一步不大会有问题。
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下雨的傍晚
8楼2012-11-26 21:29:41
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-26 22:02:57
由于当时没有MARKER了，加乙醇的时候能见到絮状沉淀，可是提了两周左右一直都是这样啊！使用CTAB提的枇杷叶DNA，因为后续要做甲基化所以要纯的，但是一会提不好啊！所以帮忙看看啊!...

加乙醇有絮状沉淀说明有DNA，不少，而且片段长度也不算短~
之后溶在水里面还是TE里面？-20还4度保存的？
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11楼2012-11-26 22:51:01
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
对了，你无水乙醇弄出絮状沉淀之后，用牙签或者枪头给挑出来到一管70%乙醇里面洗一下？这样可以排除掉很多非DNA的杂质~
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18楼2012-11-27 14:24:04
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