【答案】应助回帖

haha

31楼2012-11-29 09:28:25

jl860822

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【答案】应助回帖

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30楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-29 09:27:20
不知道，今天跑了电泳，没有条带！郁闷啊！...

增加一下你的样品量试试，每次都这样吗？

32楼2012-11-29 11:32:57

下雨的傍晚

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32楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-29 11:32:57
增加一下你的样品量试试，每次都这样吗？...

没有，之前都没有加RNA酶，我的上样量是6ul,一点迹象都没有！

haha

33楼2012-11-29 12:58:18

jl860822

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【答案】应助回帖

我觉得你这个很奇怪，应该不会加了RNase就消化没了，有点离谱，我从来没遇到过这种情况，你检查一下试剂或步骤吧，或者看看实验室其他人做的如何

34楼2012-11-29 13:56:06

看天

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33楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-29 12:58:18
没有，之前都没有加RNA酶，我的上样量是6ul,一点迹象都没有！

...

我们今天刚第一次提取跑胶15min 迁移速率很小条带非常亮而且最下面根本没有常见的RNA“弥散条带”
估计你方法有问题都把RNA提出来了 DNA那么大跑胶是应该很慢慢的吧

戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。

35楼2012-11-30 17:09:08

下雨的傍晚

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35楼: Originally posted by 看天 at 2012-11-30 17:09:08
我们今天刚第一次提取跑胶15min 迁移速率很小条带非常亮而且最下面根本没有常见的RNA“弥散条带”
估计你方法有问题都把RNA提出来了 DNA那么大跑胶是应该很慢慢的吧...

1，称0.2-0.5g叶于预冷的研钵中快速研磨（研磨中加有10mg左右的PVP），研细后加入1ml的提取缓冲液（100mmol/l Tris-Hcl,50mmol/ledta,700mmol/lNacl,2%巯基乙醇，2%PVP）摇匀，在冰上静置10min.
2,取出离心管5000r/min 10min,去上清，加1ml预热的裂解缓冲液（100mmol/l Tris-Hcl,20mmol/ledta,1.4mol/lNacl,2%巯基乙醇,2%PVP,4%CTAB）混匀，于65度水浴锅中水浴1h,期间轻轻颠倒混匀数次。
3，取出离心管冷却至室温，12000r/mim 10min离心。
4，将上清转入新的离心管中加等体积的氯仿/异戊醇混匀，12000r/mim 10min离心。
5，去上清加等体积的酚/氯仿/异戊醇,混匀，12000r/mim 10min离心。
6，将上清转入新的离心管中加等体积的氯仿/异戊醇混匀，12000r/mim 10min离心。
7，取上清，加入100ul5mol/lNacl,再加2倍体积预冷的无水乙醇，颠倒混匀。放入-20度冰箱静止30min后，12000r/mim 10min离心。
8，沉淀用70%，及无水乙醇各洗两次，各10min 左右。
9，风干后加TE溶解,加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解，55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次，12000r/min,10min,再加1/3体积异丙醇及2倍体积无水乙醇（均预冷）沉淀-20度放置30min看不到沉淀，12000r/min离心后还是没有

haha

36楼2012-11-30 17:26:33

看天

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我今天也在查关于总DNA提取的东西我看有好些虫子说即使跑胶没条带也可以P出来可能加RNA酶吧RNA降解了 DNA又很少所以电泳跑胶看不出你不妨P试试

戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。

37楼2012-11-30 18:37:18

tengwan

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引用回帖:

36楼: Originally posted by 下雨的傍晚 at 2012-11-30 17:26:33
1，称0.2-0.5g叶于预冷的研钵中快速研磨（研磨中加有10mg左右的PVP），研细后加入1ml的提取缓冲液（100mmol/l Tris-Hcl,50mmol/ledta,700mmol/lNacl,2%巯基乙醇，2%PVP）摇匀，在冰上静置10min.
2,取出离心管500 ...

第7步，为啥还加NaCl？这一步的目的为沉淀DNA

38楼2013-04-26 16:30:18