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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)

[求助] 为何CTAB法提取的DNA总是断裂？ 已有1人参与

最近一直提取的植物总DNA总是断裂，使用的是自己配制的溶液，用改良的CTAB法，提取过程已经很小心了，没有剧烈震荡，可是总是提到断裂的DNA 是什么原因呢？下图是我提的DNA 跑的0.8%琼脂糖凝胶电泳！急希望各位虫虫帮忙解答！

IMG_20121123_103631.jpg
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haha
1楼 2012-11-24 17:12:10
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-27 19:11:56
在提取的时候有一步是要加RNAse的

用异丙醇及无水乙醇沉淀时能看到明显沉淀，用RNA酶消解后就看不到沉淀了，是怎么回事啊？我沉淀的方法是，风干后的DNA加0.5ml(0.5ulRNA酶)的TE溶解，55度放置1h,加入等体积的氯仿/异戊醇抽提1次，12000r/min,10min,再加1/3体积异丙醇及2倍体积无水乙醇（均预冷）沉淀-20度放置30min看不到沉淀，离心后还是没有，怎么办？
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haha
23楼2012-11-28 15:59:45
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shuishui007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
??是ＤＮＡ断裂，是????大，ＲＮＡ没消化，太多了。上???是ＤＮＡ，下???分??????的2-3???带是ＲＮＡ，用ＲＮase消化一下就??会有了。???外，ＤＮＡ沉淀???，4000-6000rpm离心??????。
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2楼2012-11-24 20:48:19
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shuishui007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不是DNA断裂，是RNA没消化。上面的一条带是DNA，下面2-3条带是RNA，RNase消化一下就没有了。另外DNA沉淀后用4000-6000rpm离心就可以了。
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下雨的傍晚
3楼2012-11-24 20:52:44
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下雨的傍晚

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuishui007 at 2012-11-24 20:52:44
不是DNA断裂，是RNA没消化。上面的一条带是DNA，下面2-3条带是RNA，RNase消化一下就没有了。另外DNA沉淀后用4000-6000rpm离心就可以了。

谢谢，那我加RNA酶是一下！
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haha
4楼2012-11-25 14:12:31
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