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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » QPCR空白对照问题
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

[求助] QPCR空白对照问题

我原来是食品专业的，现在的研究生课题做杨梅花色苷基因表达丰度差异，我做的目的基因与看家基因ACT相对强度值很小，比其他人文献的小很多，不知道什么原因，所以ACT重做了次，并做了无模板的空白试验，发现空白组有扩增值，溶解曲线有两个小峰，不知道这是不是说明有污染？act1-act5是杨梅5个不同生长期。
麻烦高手指教，感激不尽那！

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1楼 2012-11-23 21:21:32
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-24 02:38:04
溶解首先你需要排除样品中是否有DNA的污染。从熔解曲线上看是应该形成了引物二聚体，所以读出的CT值比实际上可能偏小。引物是你自己设计的吗？最好重新设计一下引物。

我的引物是借鉴别人文献原来设计好的，可能退火温度再摸索优化下吗？
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3楼2012-11-24 15:01:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+5 2012-11-24 15:01:24
shiliyusly: 金币+12 2012-11-24 16:14:25
溶解首先你需要排除样品中是否有DNA的污染。从熔解曲线上看是应该形成了引物二聚体，所以读出的CT值比实际上可能偏小。引物是你自己设计的吗？最好重新设计一下引物。
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2楼2012-11-24 02:38:04
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
应该是退火温度的问题
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
4楼2012-11-24 16:19:37
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梦幻心雨

银虫 (小有名气)
你好，我做的无模板阴性对照也有扩增曲线和溶解曲线，也有CT值，请问你的问题解决了吗？谢谢！
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科研工作于我若即若离。。。
5楼2017-05-25 19:52:46
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