应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于酶切问题
111/2返回列表12下一页
查看: 1768  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蛋白之家

新虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切问题

今天做了个酶切  但不知道为什么会出现目的片段紧贴着两条带 不知道是切得时间过长还是酶切好？早上11点开始切切到下午7点
图中特别亮的为目的带  marker旁边是pET30b 然后是pET28a  
用Xho1和BamH1切的  载体本身是5369bp 两个酶切位点切去的是40bp

11.22酶切pET28a, pET30b.JPG_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-22 21:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要是有空白对照就好了，就是没有被切的质粒。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-22 23:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是有酶切不完全的质粒在里面，2L说的有道理，跑下质粒对照比较好。
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-23 04:32:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是酶切不完全或者过头都有可能，跑一下空白对照啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-23 06:37:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-11-22 23:44:37
要是有空白对照就好了，就是没有被切的质粒。

这是提出来的质粒28a   点了6微升的样

11.22质粒pET28a_副本.jpg
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-23 08:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 蛋白之家 at 2012-11-23 08:42:05
这是提出来的质粒28a   点了6微升的样

11.22质粒pET28a_副本.jpg
...

这个电泳染色时间有点儿短，条带分不清，建议再跑一次，酶切前后在一块胶上跑。同时跑电泳的时间也长一些。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-23 09:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-11-23 09:06:13
这个电泳染色时间有点儿短，条带分不清，建议再跑一次，酶切前后在一块胶上跑。同时跑电泳的时间也长一些。
...

哎  说来话长 我本来跑的胶挺好的 结果是在我们同学那照的照片，没给我保存就直接给删了  还得我把东西都扔了之后才发现没有保存  后来把碎的胶捡了回来重新照的
我买了新的内切酶  等厂家给送来之后 再重新做  到时候会按您说的这样跑胶看情况的
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-23 09:23:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑个质粒对照，时间应该没事，让胶跑时间长些，反正你的目的条带比较大，这样看的更清楚些
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-23 09:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 蛋白之家 at 2012-11-23 09:23:44
哎  说来话长 我本来跑的胶挺好的 结果是在我们同学那照的照片，没给我保存就直接给删了  还得我把东西都扔了之后才发现没有保存  后来把碎的胶捡了回来重新照的
我买了新的内切酶  等厂家给送来之后 再重新做   ...

不用客气 祝你实验顺利！
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-23 11:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怎么没看到切下来40bp的片段？你用的那家的酶？酶切时间过长会有星效应的
还有，单纯跑质粒不能作为对照，因为环状质粒比线性片段迁移的速率更快，可以用质粒单酶切做对照
赞一下 回复此楼
每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
10楼2012-11-23 20:34:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蛋白之家 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫没落了，除了祈祷帖子，几乎看不到有价值的帖子 +13 botar 2026-07-14 14/700 2026-07-15 19:28 by 寒流32
[基金申请] 会评 +5 无名者登山 2026-07-15 5/250 2026-07-15 18:15 by 杠就是你对
[基金申请] 生生命学部会评 +3 wuke100666 2026-07-15 3/150 2026-07-15 17:11 by kingkocxr
[基金申请] E口会评 +11 布布和一二 2026-07-13 13/650 2026-07-15 16:34 by Kittylucky
[基金申请] E口青C会评结束了吗？ 40+3 小小书虫c 2026-07-14 9/450 2026-07-15 16:04 by 安静的知了
[基金申请] 生命口C13面上会评时间 +6 luckinging 2026-07-14 9/450 2026-07-15 14:39 by 雨冰共舞
[教师之家] 内心匮乏 +13 水冰月月野兔 2026-07-12 13/650 2026-07-15 14:21 by jiduquegai
[文学芳草园] 你可曾有过这种感受？ +3 Jeanya 2026-07-09 6/300 2026-07-15 11:07 by mbtwt
[论文投稿] 农业机械学报投稿周期 +3 G0DLIN 2026-07-14 7/350 2026-07-15 09:26 by xs74101122
[基金申请] 国自然面上D口祈祷 +4 monkeynana 2026-07-14 4/200 2026-07-15 09:14 by 白水煮
[论文投稿] 跨出版社商投稿 20+4 倪好520 2026-07-13 4/200 2026-07-15 08:35 by bobvan
[基金申请] 没收到消息，再次陪跑 +3 天空星辰fly 2026-07-14 3/150 2026-07-14 19:14 by 6543yes
[基金申请] 不要再数国自然申请书的 filecode 的分隔符个数了 +13 sadpencil 2026-07-12 20/1000 2026-07-14 13:12 by 杠就是你对
[基金申请] 明天E口面上会评 +8 布布和一二 2026-07-12 9/450 2026-07-13 22:59 by QTSorange
[论文投稿] MSER送审了还被拒稿 +4 S778950906 2026-07-08 6/300 2026-07-13 16:22 by tfang
[基金申请] 祈祷青基必中 50+6 hadengry 2026-07-09 16/800 2026-07-12 20:31 by 登山虫虫
[考博] 27届辽宁大学应届毕业生申博 +3 可乐微风大海 2026-07-09 3/150 2026-07-10 21:23 by 贪玩的研究僧
[基金申请] 关于如何从代码看上不上会 +17 且听虎啸 2026-07-09 23/1150 2026-07-10 19:51 by sdfapple719
[有机交流] chemdraw 20+5 ?慕鱼? 2026-07-08 6/300 2026-07-10 15:37 by 紫枫星域
[考研] 在职考研 +6 wu5d 2026-07-08 7/350 2026-07-09 16:40 by 化工小霸王呀
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭