应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切的问题
141/2返回列表12下一页
查看: 1450  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Millgary

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切的问题 已有7人参与

我最近做双酶切，用的NEB的Sac 2和Hind 3，但是酶切10，20min,1h都没有任何条带，我最后做了质粒只加buffer的，37度20分钟后也没有条带了，我换用宝生物的Hind 3的Mbuffer，37度20分钟后也没有条带了，但是不加buffer的质粒37度20分钟后再电泳还有条带，这是怎么回事呢，以前有人碰到过这样的问题吗。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-20 11:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是质粒的条带没有，还是目的条带没有？
看下酶量有没有过多，或者质粒本身质量不够好的时候会出现这种情况。也曾试过是由于酶效率降低或失活或导致酶切后跑胶发现全部都拖尾降解。
赞一下(1人) 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2012-11-20 11:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dengyuanbao

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做的是50的体系吗？还有大约1UL的酶可以酶切5-6Ul的质粒，你50 体系的话加2.5UL的酶，然后把ddH2O 换了，用新灭菌的水试试
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-11-20 15:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴晴618

铁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by Millgary at 2012-11-20 16:32:45
酶切之后什么条带都没有了，不知道怎么回事。...

没有被没切的质粒也跑个样看看
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2012-11-20 17:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by Millgary at 2012-11-20 11:31:54
我现在的问题是，5μl质粒+5μlbuffer，37度温育20分钟后，跑电泳就看不到任何条带了，但是5μl质粒37度温育20分钟后，跑电泳还有，这个弄的我特头疼。...

照个情况看，应该是你buffer有问题，将质粒给降解了
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2012-11-20 20:44:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Millgary

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 11:28:28
是质粒的条带没有，还是目的条带没有？
看下酶量有没有过多，或者质粒本身质量不够好的时候会出现这种情况。也曾试过是由于酶效率降低或失活或导致酶切后跑胶发现全部都拖尾降解。

我现在的问题是，5μl质粒+5μlbuffer，37度温育20分钟后，跑电泳就看不到任何条带了，但是5μl质粒37度温育20分钟后，跑电泳还有，这个弄的我特头疼。
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-20 11:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换一管buffer试试
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-11-20 11:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Millgary

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 11:39:30
换一管buffer试试

随酶给了两管Buffer,我都做了一下，还是不行。
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-20 11:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by Millgary at 2012-11-20 11:31:54
我现在的问题是，5μl质粒+5μlbuffer，37度温育20分钟后，跑电泳就看不到任何条带了，但是5μl质粒37度温育20分钟后，跑电泳还有，这个弄的我特头疼。...

说明你质粒被降解了，你用的东西，可能有个别试剂污染了核酸酶了
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2012-11-20 12:31:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴晴618

铁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本身被酶切的质粒有条带没？
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-20 16:25:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Millgary

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 晴晴618 at 2012-11-20 16:25:58
本身被酶切的质粒有条带没？

酶切之后什么条带都没有了，不知道怎么回事。
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-20 16:32:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxlzzzz

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-20 12:31:02
说明你质粒被降解了，你用的东西，可能有个别试剂污染了核酸酶了...

建议提取质粒最后的洗脱用灭菌水不要用试剂盒的TE，还有洗脱的灭菌水最好要合格，不要被污染。如果有细菌，肯定就有核酸酶。从对比试验看，楼主多注意质粒本身问题。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Millgary
你做了什么，什么都没做。
10楼2012-11-20 16:38:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Millgary 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 12/600 2026-08-12 01:27 by 南京中西医
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 9/450 2026-08-11 22:12 by 医学老男孩
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭