24小时热门版块排行榜    

查看: 1507  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Millgary

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切的问题 已有7人参与

我最近做双酶切,用的NEB的Sac 2和Hind 3,但是酶切10,20min,1h都没有任何条带,我最后做了质粒只加buffer的,37度20分钟后也没有条带了,我换用宝生物的Hind 3的Mbuffer,37度20分钟后也没有条带了,但是不加buffer的质粒37度20分钟后再电泳还有条带,这是怎么回事呢,以前有人碰到过这样的问题吗。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换一管buffer试试
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2012-11-20 11:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是质粒的条带没有,还是目的条带没有?
看下酶量有没有过多,或者质粒本身质量不够好的时候会出现这种情况。也曾试过是由于酶效率降低或失活或导致酶切后跑胶发现全部都拖尾降解。
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2012-11-20 11:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Millgary

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 11:28:28
是质粒的条带没有,还是目的条带没有?
看下酶量有没有过多,或者质粒本身质量不够好的时候会出现这种情况。也曾试过是由于酶效率降低或失活或导致酶切后跑胶发现全部都拖尾降解。

我现在的问题是,5μl质粒+5μlbuffer,37度温育20分钟后,跑电泳就看不到任何条带了,但是5μl质粒37度温育20分钟后,跑电泳还有,这个弄的我特头疼。
3楼2012-11-20 11:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Millgary

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 11:39:30
换一管buffer试试

随酶给了两管Buffer,我都做了一下,还是不行。
5楼2012-11-20 11:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见