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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Millgary

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切的问题 已有7人参与

我最近做双酶切，用的NEB的Sac 2和Hind 3，但是酶切10，20min,1h都没有任何条带，我最后做了质粒只加buffer的，37度20分钟后也没有条带了，我换用宝生物的Hind 3的Mbuffer，37度20分钟后也没有条带了，但是不加buffer的质粒37度20分钟后再电泳还有条带，这是怎么回事呢，以前有人碰到过这样的问题吗。
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1楼 2012-11-20 11:25:43
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wxlzzzz

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-20 12:31:02
说明你质粒被降解了，你用的东西，可能有个别试剂污染了核酸酶了...

建议提取质粒最后的洗脱用灭菌水不要用试剂盒的TE，还有洗脱的灭菌水最好要合格，不要被污染。如果有细菌，肯定就有核酸酶。从对比试验看，楼主多注意质粒本身问题。
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Millgary
你做了什么，什么都没做。
10楼2012-11-20 16:38:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是质粒的条带没有，还是目的条带没有？
看下酶量有没有过多，或者质粒本身质量不够好的时候会出现这种情况。也曾试过是由于酶效率降低或失活或导致酶切后跑胶发现全部都拖尾降解。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2012-11-20 11:28:28
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Millgary

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 11:28:28
是质粒的条带没有，还是目的条带没有？
看下酶量有没有过多，或者质粒本身质量不够好的时候会出现这种情况。也曾试过是由于酶效率降低或失活或导致酶切后跑胶发现全部都拖尾降解。

我现在的问题是，5μl质粒+5μlbuffer，37度温育20分钟后，跑电泳就看不到任何条带了，但是5μl质粒37度温育20分钟后，跑电泳还有，这个弄的我特头疼。
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3楼2012-11-20 11:31:54
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
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换一管buffer试试
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-11-20 11:39:30
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