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joycetoo

铁虫 (小有名气)

[求助] 噬菌体筛选(负筛)

求助噬菌体筛选的高手,我现在在用Fc融合蛋白从噬菌体抗体库中筛选,采用96孔板筛选方法,每轮筛选时用Fc蛋白37℃先与抗体库孵育一个小时,然后把孵育后的phage与融合蛋白37℃孵育2小时。
采用的洗涤强度是第一轮5遍,第一遍吹打5次后静置5分钟;第二轮抗原量降了一半,同时洗涤强度增加到10次;结果第二轮筛选的滴度下降太快了,测滴度时,10的5次方的板子没有长出来。
我想问一下大家,你们做酶条筛选的时候,洗涤强度和抗原包被量是怎么变化的?谢谢高手指教!
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