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lcu0919

金虫 (小有名气)

[求助] 噬菌体p3展示肽库

在这里,恳请做过噬菌体p3展示肽库(尤其是按neb公司做的)的各位大师,给予小弟指点,刚开始接触这方面,很多地方都不懂,到目前为止,实验进展全无,毕业已成问题,大家帮个忙,谢谢!
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敢想,敢拼!
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lcu0919(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。热心的虫子 2013-07-19 12:03:28
你说的太大了,不知道如何给你帮助。这个肽库一般是用来筛选表位的,你按照说明书上,一步步做就下来了注意材料的准备就好了
2楼2013-07-18 13:36:05
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lcu0919

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-18 13:36:05
你说的太大了,不知道如何给你帮助。这个肽库一般是用来筛选表位的,你按照说明书上,一步步做就下来了注意材料的准备就好了

就是按照那个说明书,没有成功,电转后没有蓝斑,你知道关于那个感受态细胞和点转化的条件,需要有改动吗?
敢想,敢拼!
3楼2013-07-18 14:00:31
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-07-18 15:00:31
就是按照那个说明书,没有成功,电转后没有蓝斑,你知道关于那个感受态细胞和点转化的条件,需要有改动吗?...

你的篮板你在稀释到多少倍以后没有篮板的。你已经做了几轮了?
4楼2013-07-18 17:16:53
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-07-18 15:00:31
就是按照那个说明书,没有成功,电转后没有蓝斑,你知道关于那个感受态细胞和点转化的条件,需要有改动吗?...

我记得没做电转啊,亲,直接侵染,侵染完涂平班,是从淘选下来的噬菌体稀释10的N次方倍后,才用稀释液涂得平板,原液涂平班篮板就慢板了。
5楼2013-07-18 17:19:17
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lcu0919

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-18 17:16:53
你的篮板你在稀释到多少倍以后没有篮板的。你已经做了几轮了?...

电转后,一个蓝斑都没有,如果感受态细胞不够浓,会不会是这种情况,或者说是质粒的问题
敢想,敢拼!
6楼2013-07-19 09:11:44
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lcu0919

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-18 17:19:17
我记得没做电转啊,亲,直接侵染,侵染完涂平班,是从淘选下来的噬菌体稀释10的N次方倍后,才用稀释液涂得平板,原液涂平班篮板就慢板了。...

哥,怪我没说清,我电的m13质粒
敢想,敢拼!
7楼2013-07-19 09:12:34
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


lcu0919: 金币+1, 有帮助, 好吧 2013-07-19 15:33:07
引用回帖:
7楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-07-19 10:12:34
哥,怪我没说清,我电的m13质粒...

电转的我还真没做过,这方面就不是特别专业了,不过从你说的方面来说,有可能是感受态的问题,也有可能是真的没有噬菌体下来。
8楼2013-07-19 09:55:36
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