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lcu0919

金虫 (小有名气)


[交流] 噬菌体电转化后,倒平板,没有蓝斑

求大神指教,电转化后,用SOC培养基,复苏1h,与top和er2738,一块倒平板,没有蓝斑,不知是哪部分的原因。
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huoyongting

金虫 (正式写手)


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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lcu0919: 金币+1, 有道理 2013-05-23 09:25:24
引用回帖:
8楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-22 21:22:33
你用什么做的啊,别给我说是直接转DNA吧,什么载体?...

当然是用DNA了,我用的是pCANTAB 5E,你要知道M13长700~~900nm呢,怎么可能转进去,就算是感染的时候也只是注入DNA的
10楼2013-05-23 08:14:04
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huoyongting

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lcu0919(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-22 21:57:30
你是不是没说清楚,你是用噬菌体载体电转的吧,噬菌体的话直接感染就行了呀,你的平板上加IPTG和X-gal了没
2楼2013-05-22 13:46:36
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lcu0919

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 13:46:36
你是不是没说清楚,你是用噬菌体载体电转的吧,噬菌体的话直接感染就行了呀,你的平板上加IPTG和X-gal了没

平板肯定没有问题,我是做噬菌体展示,一般都是直接侵染,我是想知道,为什么电转后,反而没有蓝斑了
3楼2013-05-22 14:16:40
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
祝福,祝一切顺利,科研成果累累!
4楼2013-05-22 14:48:32
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huoyongting

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-22 14:16:40
平板肯定没有问题,我是做噬菌体展示,一般都是直接侵染,我是想知道,为什么电转后,反而没有蓝斑了...

但是如果你直接拿噬菌体电转的话怎么可能转进去呢,我也做噬菌体展示的
5楼2013-05-22 15:22:22
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lcu0919

金虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 15:22:22
但是如果你直接拿噬菌体电转的话怎么可能转进去呢,我也做噬菌体展示的...

我用的M13啊,怎么可能转不进去
6楼2013-05-22 21:21:03
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lcu0919

金虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by gzl9901 at 2013-05-22 14:48:32
祝福,祝一切顺利,科研成果累累!

谢谢,不过这个时候,您要是能解决我的实际问题,我会更加感谢你
7楼2013-05-22 21:21:41
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lcu0919

金虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 15:22:22
但是如果你直接拿噬菌体电转的话怎么可能转进去呢,我也做噬菌体展示的...

你用什么做的啊,别给我说是直接转DNA吧,什么载体?
8楼2013-05-22 21:22:33
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匿名

用户注销 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
9楼2013-05-22 22:00:30
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lcu0919

金虫 (小有名气)


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10楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-23 08:14:04
当然是用DNA了,我用的是pCANTAB 5E,你要知道M13长700~~900nm呢,怎么可能转进去,就算是感染的时候也只是注入DNA的...

不是很懂,能不能具体讲一下,刚开始做,谢谢了!
11楼2013-05-23 09:24:51
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lcu0919

金虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-23 08:14:04
当然是用DNA了,我用的是pCANTAB 5E,你要知道M13长700~~900nm呢,怎么可能转进去,就算是感染的时候也只是注入DNA的...

你这个是不是p8展示啊,需要辅助噬菌体
12楼2013-05-23 09:28:08
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huoyongting

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-23 09:28:08
你这个是不是p8展示啊,需要辅助噬菌体...

我用的是P3展示,需要辅助噬菌体的,你做的是哪方面的库
13楼2013-05-23 11:59:05
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lcu0919

金虫 (小有名气)


引用回帖:
13楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-23 11:59:05
我用的是P3展示,需要辅助噬菌体的,你做的是哪方面的库...

随机肽库啊
14楼2013-05-23 12:16:32
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huoyongting

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-23 12:16:32
随机肽库啊...

哦,那你那是不需要辅助噬菌体的,而且只能提取单链DNA了,所以最好的方法就是感染,电转不可取
15楼2013-05-23 16:46:40
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