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lcu0919

金虫 (小有名气)

[交流] 噬菌体电转化后，倒平板，没有蓝斑

求大神指教，电转化后，用SOC培养基，复苏1h，与top和er2738，一块倒平板，没有蓝斑，不知是哪部分的原因。
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1楼 2013-05-22 11:03:07
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huoyongting

金虫 (正式写手)
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lcu0919: 金币+1, 有道理 2013-05-23 09:25:24
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8楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-22 21:22:33
你用什么做的啊，别给我说是直接转DNA吧，什么载体？...

当然是用DNA了，我用的是pCANTAB 5E，你要知道M13长700~~900nm呢，怎么可能转进去，就算是感染的时候也只是注入DNA的
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10楼2013-05-23 08:14:04
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huoyongting

金虫 (正式写手)
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lcu0919(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-22 21:57:30
你是不是没说清楚，你是用噬菌体载体电转的吧，噬菌体的话直接感染就行了呀，你的平板上加IPTG和X-gal了没
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2楼2013-05-22 13:46:36
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 13:46:36
你是不是没说清楚，你是用噬菌体载体电转的吧，噬菌体的话直接感染就行了呀，你的平板上加IPTG和X-gal了没

平板肯定没有问题，我是做噬菌体展示，一般都是直接侵染，我是想知道，为什么电转后，反而没有蓝斑了
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3楼2013-05-22 14:16:40
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)
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祝福，祝一切顺利，科研成果累累！
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4楼2013-05-22 14:48:32
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huoyongting

金虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-22 14:16:40
平板肯定没有问题，我是做噬菌体展示，一般都是直接侵染，我是想知道，为什么电转后，反而没有蓝斑了...

但是如果你直接拿噬菌体电转的话怎么可能转进去呢，我也做噬菌体展示的
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5楼2013-05-22 15:22:22
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 15:22:22
但是如果你直接拿噬菌体电转的话怎么可能转进去呢，我也做噬菌体展示的...

我用的M13啊，怎么可能转不进去
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6楼2013-05-22 21:21:03
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gzl9901 at 2013-05-22 14:48:32
祝福，祝一切顺利，科研成果累累！

谢谢，不过这个时候，您要是能解决我的实际问题，我会更加感谢你
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7楼2013-05-22 21:21:41
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 15:22:22
但是如果你直接拿噬菌体电转的话怎么可能转进去呢，我也做噬菌体展示的...

你用什么做的啊，别给我说是直接转DNA吧，什么载体？
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8楼2013-05-22 21:22:33
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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9楼2013-05-22 22:00:30
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lcu0919

金虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-23 08:14:04
当然是用DNA了，我用的是pCANTAB 5E，你要知道M13长700~~900nm呢，怎么可能转进去，就算是感染的时候也只是注入DNA的...

不是很懂，能不能具体讲一下，刚开始做，谢谢了！
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11楼2013-05-23 09:24:51
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-23 08:14:04
当然是用DNA了，我用的是pCANTAB 5E，你要知道M13长700~~900nm呢，怎么可能转进去，就算是感染的时候也只是注入DNA的...

你这个是不是p8展示啊，需要辅助噬菌体
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12楼2013-05-23 09:28:08
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huoyongting

金虫 (正式写手)
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12楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-23 09:28:08
你这个是不是p8展示啊，需要辅助噬菌体...

我用的是P3展示，需要辅助噬菌体的，你做的是哪方面的库
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13楼2013-05-23 11:59:05
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-23 11:59:05
我用的是P3展示，需要辅助噬菌体的，你做的是哪方面的库...

随机肽库啊
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14楼2013-05-23 12:16:32
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huoyongting

金虫 (正式写手)
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14楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-05-23 12:16:32
随机肽库啊...

哦，那你那是不需要辅助噬菌体的，而且只能提取单链DNA了，所以最好的方法就是感染，电转不可取
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15楼2013-05-23 16:46:40
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