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lcu0919

金虫 (小有名气)

[求助] 噬菌体p3展示肽库

在这里，恳请做过噬菌体p3展示肽库（尤其是按neb公司做的）的各位大师，给予小弟指点，刚开始接触这方面，很多地方都不懂，到目前为止，实验进展全无，毕业已成问题，大家帮个忙，谢谢！
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敢想，敢拼！
1楼 2013-07-18 09:33:31
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lcu0919(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。热心的虫子 2013-07-19 12:03:28
你说的太大了，不知道如何给你帮助。这个肽库一般是用来筛选表位的，你按照说明书上，一步步做就下来了注意材料的准备就好了
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2楼2013-07-18 13:36:05
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-18 13:36:05
你说的太大了，不知道如何给你帮助。这个肽库一般是用来筛选表位的，你按照说明书上，一步步做就下来了注意材料的准备就好了

就是按照那个说明书，没有成功，电转后没有蓝斑，你知道关于那个感受态细胞和点转化的条件，需要有改动吗？
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敢想，敢拼！
3楼2013-07-18 14:00:31
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-07-18 15:00:31
就是按照那个说明书，没有成功，电转后没有蓝斑，你知道关于那个感受态细胞和点转化的条件，需要有改动吗？...

你的篮板你在稀释到多少倍以后没有篮板的。你已经做了几轮了？
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4楼2013-07-18 17:16:53
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-07-18 15:00:31
就是按照那个说明书，没有成功，电转后没有蓝斑，你知道关于那个感受态细胞和点转化的条件，需要有改动吗？...

我记得没做电转啊，亲，直接侵染，侵染完涂平班，是从淘选下来的噬菌体稀释10的N次方倍后，才用稀释液涂得平板，原液涂平班篮板就慢板了。
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5楼2013-07-18 17:19:17
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-18 17:16:53
你的篮板你在稀释到多少倍以后没有篮板的。你已经做了几轮了？...

电转后，一个蓝斑都没有，如果感受态细胞不够浓，会不会是这种情况，或者说是质粒的问题
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敢想，敢拼！
6楼2013-07-19 09:11:44
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lcu0919

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ericyo918 at 2013-07-18 17:19:17
我记得没做电转啊，亲，直接侵染，侵染完涂平班，是从淘选下来的噬菌体稀释10的N次方倍后，才用稀释液涂得平板，原液涂平班篮板就慢板了。...

哥，怪我没说清，我电的m13质粒
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敢想，敢拼！
7楼2013-07-19 09:12:34
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
lcu0919: 金币+1, ★有帮助, 好吧 2013-07-19 15:33:07
引用回帖:
7楼: Originally posted by lcu0919 at 2013-07-19 10:12:34
哥，怪我没说清，我电的m13质粒...

电转的我还真没做过，这方面就不是特别专业了，不过从你说的方面来说，有可能是感受态的问题，也有可能是真的没有噬菌体下来。
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8楼2013-07-19 09:55:36
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