| 查看: 2090 | 回复: 6 | |||
[求助]
求助，关于pcr扩增后产物序列在ncbi上的比对，以及3' race接头引物的设计。。
|
|
我是研一的，刚接触实验，什么都不懂，在摸索过程中，希望大家多多帮助。。 两个问题，第一，我通过pcr扩增出了一个与预期大小一样的片段，pcr产物没有经过纯化回收就直接送到公司测序了。然后把测序结果在ncbi上比对了一下，结果我看不懂，希望大家帮我分析一下。 我测得的这个序列是我想要的基因么？为什么会中间空掉那么多？能接着往下做3' race么？  下面这个是我pcr的电泳图  第二个问题，接着往下做3' race，不买试剂盒，自己合成接头引物该怎么设计。。我从网上找了引物试了一下，结果就是，都没有结果。。  这是我的接头引物（从网上借的），3'ap-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACGGCATGACAGTGTTTTTTTTTTTTTTTTTT 3'Primer-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG 这个是自己设计的特异性引物，不过是根据上面那个公司测序序列设计的，很可能有很大关系，GSP1-TCGAACAACCGTTTATCAGGGCCAGTC   调了退火温度，换了rna模板的结果都是这样。我个人觉得是引物问题，是接头引物不能通用？还是需要我重新测中间片段的序列再设计特异性引物？ 因为是新人，问题比较多，但是金币比较少，希望大家不吝赐教，先谢谢各位了，帮助我进步吧。。  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有208人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于水稻GUS基因的PCR扩增问题
已经有0人回复
- 求助关于甲基化PCR实验
已经有8人回复
- 求助！关于issr-pcr问题，急急急！！
已经有2人回复
- 新手求助关于逆转录PCR问题
已经有9人回复
- 关于cloning用的DNA polymerase，急~求助大侠们~~
已经有8人回复
- 关于PCR实验中缓冲液的问题求助
已经有2人回复
- 求助PCR扩增
已经有0人回复
- 求助各位大神--关于PCR的问题
已经有9人回复
- 菜鸟求助，关于克隆片段的定位
已经有2人回复
- 求助，关于搭桥PCR
已经有6人回复
- 紧急求助：荧光定量PCR法提取EB病毒（EBV）DNA提取以及扩增曲线图
已经有1人回复
- 求助大鼠肝组织RT-PCR内参引物序列，扩增长度在300左右
已经有1人回复
- 紧急求助:关于PCR过程中出现弥散的问题。双歧杆菌。。。。。。。。。。。。。。。
已经有3人回复
- 关于DGGE的问题，谢谢
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于PCR的模板问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于扩增未知序列，生物达人请进~
已经有10人回复
- 【求助/交流】求助，关于cDNA文库构建的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的小问题,请高手指点 【问题已解决】
已经有7人回复
- 【求助/交流】各位大虾，有两个关于pcr扩增的两个问题想向各位咨询一下
已经有2人回复
- 【求助/交流】关于菌落PCR
已经有12人回复
2楼2012-11-13 18:00:50
3楼2012-11-14 19:52:06
Fleaves
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 100 (初中生)
- 金币: 18980.6
- 散金: 526
- 红花: 42
- 帖子: 2644
- 在线: 412.1小时
- 虫号: 1473397
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
4楼2012-11-27 13:17:47
5楼2012-12-03 22:32:09
6楼2013-03-19 02:03:31
hwchen2000
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1950.5
- 帖子: 444
- 在线: 89.7小时
- 虫号: 216162
- 注册: 2006-03-11
- 专业: 生物化学与分子生物学
7楼2013-07-28 10:01:24
