24小时热门版块排行榜    

查看: 1988  |  回复: 6

catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

[求助] 单酶切两条带?

我将一个1600左右的片段连接到4100左右的质粒上,转化后挑了四个克隆,其中两个提质粒用HindIII单酶切居然出现两个条带,用EcoRI和SalI分别单酶切也是完全一样的情况,请问这可能是什么原因? 酶切电泳图如文件(第1、4泳道是质粒用HindIII单酶切,上面一条带是4100左右,下面一条带是3000左右,第5、8泳道是对应的未酶切的质粒)
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : DSCF0765.JPG
  • 2012-10-24 14:56:11, 3.81 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

[url=http://weibo.com/2152924384?s=6uyXnP][img]http://service.t.sina.com.cn/widget/qmd/2152924384/13d43368/7.png[/img][/url]
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

once1015

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
catmihzh: 金币+1, 有帮助, 好吧 2012-10-24 19:38:56
测个序 又不贵, 而且能直接找到问题。
2楼2012-10-24 15:51:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

honjie

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
catmihzh: 金币+1, 有帮助, 谢谢回复 2012-10-24 19:39:31
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-27 16:01:59
原因可能有2个:1、有2个或多个酶切位点,这个你需要根据质粒和你目的片段的序列去分析;2、你看看这几款酶的说明书中,是否是星号活性导致的。
建议:在确保序列无误的情况下,换支酶,在PCR仪器上切。
3楼2012-10-24 16:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
catmihzh: 金币+1, 有帮助, 谢谢回复 2012-10-24 19:43:26
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-27 16:02:09
1、还在下载图像的过程中,先推测一下:可能接头产生相应的酶切位点了;将你的片段与插入序列连接后用软件分析一下,看看是否有2个切点;
2、图像仍在下载中(楼主,以后为了大家帮忙能够尽快看到结果,请把图像处理好,保持几十k就行了,图像一点点就可以)。
3、 1/4单酶切,两条相加超过7k,你的是5.7k,不对头。2/3是啥??与1/4的上头的一样大。(切开的非目的重组片段?)
4、 请修改问题,将酶切体系用量、时间等写清楚,每个泳道是啥?说清楚大家才能帮你找原因哈。
5、 手持相机拍照可在前面加一块550-580nm带通滤光片。
4楼2012-10-24 16:45:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
5楼2012-10-24 16:56:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-24 16:45:47
1、还在下载图像的过程中,先推测一下:可能接头产生相应的酶切位点了;将你的片段与插入序列连接后用软件分析一下,看看是否有2个切点;
2、图像仍在下载中(楼主,以后为了大家帮忙能够尽快看到结果,请把图像处 ...

2、3泳道是明显没连上片段的质粒,所以我就没说明。体系应该没问题,我之前都用这个体系,时间3-4小时。本来是有凝胶成像系统的,最近坏了,还没修好。
[url=http://weibo.com/2152924384?s=6uyXnP][img]http://service.t.sina.com.cn/widget/qmd/2152924384/13d43368/7.png[/img][/url]
6楼2012-10-24 19:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sketch

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-27 16:02:20
可能是酶切不完全 ,3000左右的可能是没有切开的双链质粒,跑得比较快。其实两条带是比较正常的,
7楼2012-10-27 14:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 catmihzh 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +3 vv迷 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:05 by f19980501
[考研] 311求调剂 +13 冬十三 2026-03-15 14/700 2026-03-21 22:10 by peike
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 317求调剂 +9 申子申申 2026-03-19 15/750 2026-03-21 17:31 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
请填处理意见