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catmihzh木虫 (小有名气)
虫虫特攻队队长
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[求助]
单酶切两条带？
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| 我将一个1600左右的片段连接到4100左右的质粒上，转化后挑了四个克隆，其中两个提质粒用HindIII单酶切居然出现两个条带，用EcoRI和SalI分别单酶切也是完全一样的情况，请问这可能是什么原因？ 酶切电泳图如文件（第1、4泳道是质粒用HindIII单酶切，上面一条带是4100左右，下面一条带是3000左右，第5、8泳道是对应的未酶切的质粒） |
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2012-10-24 14:56:11, 3.81 M
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【答案】应助回帖
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catmihzh: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回复 2012-10-24 19:43:26
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-27 16:02:09
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1、还在下载图像的过程中，先推测一下：可能接头产生相应的酶切位点了；将你的片段与插入序列连接后用软件分析一下，看看是否有2个切点； 2、图像仍在下载中（楼主，以后为了大家帮忙能够尽快看到结果，请把图像处理好，保持几十k就行了，图像一点点就可以）。 3、 1/4单酶切，两条相加超过7k，你的是5.7k，不对头。2/3是啥？？与1/4的上头的一样大。（切开的非目的重组片段？） 4、 请修改问题，将酶切体系用量、时间等写清楚，每个泳道是啥？说清楚大家才能帮你找原因哈。 5、 手持相机拍照可在前面加一块550-580nm带通滤光片。 |
4楼2012-10-24 16:45:47
catmihzh
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6楼2012-10-24 19:43:01
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