应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助-4Kb的基因P不出来
31/1返回列表
查看: 1907  |  回复: 37
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 求助-4Kb的基因P不出来

有一个4Kb的基因，我需要把它P出来然后够载体，用cDNA二链为模板，混合酶、rTaq、LA Taq、pfu等酶都试过了，退火温度也做过梯度，还有，分成两段进行拼接的方法也用过，都是P不出来。请各位大虾指点一二，不甚感激！！

[ Last edited by 1949stone on 2012-10-23 at 07:50 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
太阳出来，星星要走。
1楼 2012-10-18 09:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木左左

银虫 (正式写手)
同求啊，我的2000+的基因高GC（65%）一直扩不出来啊，用了很多酶，内参能扩出来，目的基因出不来，还有GDNA残留，用Dnase1消化过了.....郁闷
赞一下 回复此楼
28楼2012-10-20 20:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木左左

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 昺昺 at 2012-10-18 12:22:01
谢谢！我原先用的是cDNA一链，没有P出来，考虑到是不是浓度不够，现在是用cDNA二链。我也试过拉其中的1Kb，也是没有成功，PCR程序、以及各种Taq酶也都试过了，没有作用，从基因组里面可以很容易P出片段，还请继续指 ...

麻烦问一下，这个cDNA第二链合成什么原理啊？有必要合成第二链吗？
赞一下 回复此楼
30楼2012-10-21 21:47:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 昺昺 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭