24小时热门版块排行榜    

查看: 2063  |  回复: 37
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 求助-4Kb的基因P不出来

有一个4Kb的基因,我需要把它P出来然后够载体,用cDNA二链为模板,混合酶、rTaq、LA Taq、pfu等酶都试过了,退火温度也做过梯度,还有,分成两段进行拼接的方法也用过,都是P不出来。请各位大虾指点一二,不甚感激!!

[ Last edited by 1949stone on 2012-10-23 at 07:50 ]
回复此楼
太阳出来,星星要走。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木左左

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 昺昺 at 2012-10-18 12:22:01
谢谢!我原先用的是cDNA一链,没有P出来,考虑到是不是浓度不够,现在是用cDNA二链。我也试过拉其中的1Kb,也是没有成功,PCR程序、以及各种Taq酶也都试过了,没有作用,从基因组里面可以很容易P出片段,还请继续指 ...

麻烦问一下,这个cDNA第二链合成什么原理啊?有必要合成第二链吗?
30楼2012-10-21 21:47:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 38 个回答

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果基因片段过大的话,建议分成几段P,然后拼接!
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-10-18 10:17:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hj890509

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
昺昺: 金币+3, 有帮助 2012-10-18 10:55:04
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-18 18:53:37
我们实验室也做一个基因大概4.7kb,刚开始P不出来,后来分成了四段分别P出来后拼接,现在已经做成功了,多试试
3楼2012-10-18 10:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

昺昺

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hj890509 at 2012-10-18 10:45:26
我们实验室也做一个基因大概4.7kb,刚开始P不出来,后来分成了四段分别P出来后拼接,现在已经做成功了,多试试

谢谢指点!那我分成三段也试过,还有,你在做拼接过程中,那些需要特别注意的,比如引物、PCR程序、扩增长度啊等等,我拼接的时候有两段都是1Kb左右,也是照样P不出来
太阳出来,星星要走。
4楼2012-10-18 10:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:41 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考博] 博士推荐 +5 花儿笑? 2026-02-21 6/300 2026-02-28 18:53 by nxgogo
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[教师之家] 版面费该交吗 +15 苹果在哪里 2026-02-22 18/900 2026-02-28 18:20 by mibaomingg
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见