应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白诱导表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
171/2返回列表12下一页
查看: 1385  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lxh502976898

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达

我最近构建了表达载体，酶切鉴定也合格，加IPTG诱导后没有又到处目的蛋白条带，急需帮助。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-17 11:22:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-20 14:08:29
大哥 你能不能一次性说完  出现不表达的可能性原因，...

不同物种的密码子偏好不同。比如说人或者植物的密码子使用和原核生物的不大一样。你要把目的基因按照菌的密码子翻译，看看和序列与原来的氨基酸序列是否一样。而且，如果使用了菌稀有的密码子，表达效率会很差。
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2012-10-21 02:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你换个载体或是表达菌株尝试一下。
应该是两者不相容
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-17 11:26:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiayongxiu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-17 14:51:08
首先，确认你的表达载体的启动子，看是否是通过IPTG诱导的；其次是筛选诱导培养的条件，包括IPTG的量、诱导温度、转速等等；还有就是诱导蛋白纯化过程了，有的蛋白是以包涵体的形式存在，所以还得注意了。
赞一下 回复此楼
一切都要靠自己努力
3楼2012-10-17 11:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-10-17 11:31:37
首先，确认你的表达载体的启动子，看是否是通过IPTG诱导的；其次是筛选诱导培养的条件，包括IPTG的量、诱导温度、转速等等；还有就是诱导蛋白纯化过程了，有的蛋白是以包涵体的形式存在，所以还得注意了。

能确定是IPTG诱导，我是打算先诱导一下，确定能否能表达之后再优化条件，
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-17 15:31:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-10-17 11:26:39
你换个载体或是表达菌株尝试一下。
应该是两者不相容

那不是一天两天的事啊
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-17 15:32:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说没有诱导出来是用的总蛋白还是可溶蛋白，有时候诱导出的蛋白直接形成包涵体了。
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-18 09:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-18 09:06:10
你说没有诱导出来是用的总蛋白还是可溶蛋白，有时候诱导出的蛋白直接形成包涵体了。

包涵体这事我知道，我的加完诱导剂诱导后，取1ml菌液离心，上清和沉淀都做电泳 按理说诱导出来的蛋白应该在沉淀里啊  然后再进行裂解 看是否形成包涵体
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-19 08:50:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-19 08:50:24
包涵体这事我知道，我的加完诱导剂诱导后，取1ml菌液离心，上清和沉淀都做电泳 按理说诱导出来的蛋白应该在沉淀里啊  然后再进行裂解 看是否形成包涵体...

虽然多数情况目的蛋白是在菌体里，少数情况也会分泌到胞外。你说的没有是菌体里没有，还是菌体上清都没有呢？还有你用的是什么表达载体？确定目的蛋白前没有信号肽？
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-19 08:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 08:57:06
虽然多数情况目的蛋白是在菌体里，少数情况也会分泌到胞外。你说的没有是菌体里没有，还是菌体上清都没有呢？还有你用的是什么表达载体？确定目的蛋白前没有信号肽？...

原核表达 载体pet30a 菌体和上清都没有特异性条带 目的蛋白如果有信号肽会出现什么情况 我从全基因合成到载体构建 都是送到外面生化公司做的 只是回来做个酶切鉴定 然后诱导表达和纯化 以及后续活性实验
赞一下 回复此楼
9楼2012-10-19 15:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狐狸尾巴

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你应该说清楚是什么蛋白，用的是什么表达菌株，诱导剂浓度，诱导温度，诱导时间等等，这样别人才好给你解答
赞一下 回复此楼
10楼2012-10-19 16:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxh502976898 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 322求调剂 +5 旧吢 2026-03-24 5/250 2026-03-28 13:26 by Iveryant
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 292求调剂 +14 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 15/750 2026-03-28 08:45 by WYUMater
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭