24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1393  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达

我最近构建了表达载体,酶切鉴定也合格,加IPTG诱导后没有又到处目的蛋白条带,急需帮助。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 08:57:06
虽然多数情况目的蛋白是在菌体里,少数情况也会分泌到胞外。你说的没有是菌体里没有,还是菌体上清都没有呢?还有你用的是什么表达载体?确定目的蛋白前没有信号肽?...

原核表达 载体pet30a 菌体和上清都没有特异性条带 目的蛋白如果有信号肽会出现什么情况 我从全基因合成到载体构建 都是送到外面生化公司做的 只是回来做个酶切鉴定 然后诱导表达和纯化 以及后续活性实验
9楼2012-10-19 15:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你换个载体或是表达菌株尝试一下。
应该是两者不相容
2楼2012-10-17 11:26:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiayongxiu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-17 14:51:08
首先,确认你的表达载体的启动子,看是否是通过IPTG诱导的;其次是筛选诱导培养的条件,包括IPTG的量、诱导温度、转速等等;还有就是诱导蛋白纯化过程了,有的蛋白是以包涵体的形式存在,所以还得注意了。
一切都要靠自己努力
3楼2012-10-17 11:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-10-17 11:31:37
首先,确认你的表达载体的启动子,看是否是通过IPTG诱导的;其次是筛选诱导培养的条件,包括IPTG的量、诱导温度、转速等等;还有就是诱导蛋白纯化过程了,有的蛋白是以包涵体的形式存在,所以还得注意了。

能确定是IPTG诱导,我是打算先诱导一下,确定能否能表达之后再优化条件,
4楼2012-10-17 15:31:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +6 星沉uu 2026-03-26 7/350 2026-03-31 10:19 by GdShizy
[考研] 看看我!301求调剂 081700 +3 一个小明同学 2026-03-24 3/150 2026-03-31 09:40 by longlotian
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
[考研] 085601材料工程找调剂 +17 oatmealR 2026-03-29 18/900 2026-03-30 19:21 by Wang200018
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +18 Mr. Z 2026-03-25 19/950 2026-03-30 19:01 by Wang200018
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 322求调剂:一志愿湖南大学 材料与化工(085600),已过六级。 +9 XX小邓 2026-03-29 9/450 2026-03-30 17:18 by limeifeng
[考研] 求调剂 +10 张zz111 2026-03-27 11/550 2026-03-30 09:17 by 无际的草原
[考研] 调剂310 +12 温柔的晚安 2026-03-25 13/650 2026-03-29 20:01 by 无际的草原
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 343求调剂 +6 爱羁绊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 12:00 by 无际的草原
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 085600,材料与化工321分,求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +5 .m.. 2026-03-25 5/250 2026-03-27 11:08 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
信息提示
请填处理意见