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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达

我最近构建了表达载体,酶切鉴定也合格,加IPTG诱导后没有又到处目的蛋白条带,急需帮助。。。。。
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 08:57:06
虽然多数情况目的蛋白是在菌体里,少数情况也会分泌到胞外。你说的没有是菌体里没有,还是菌体上清都没有呢?还有你用的是什么表达载体?确定目的蛋白前没有信号肽?...

原核表达 载体pet30a 菌体和上清都没有特异性条带 目的蛋白如果有信号肽会出现什么情况 我从全基因合成到载体构建 都是送到外面生化公司做的 只是回来做个酶切鉴定 然后诱导表达和纯化 以及后续活性实验
9楼2012-10-19 15:50:04
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查看全部 17 个回答

yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你换个载体或是表达菌株尝试一下。
应该是两者不相容
2楼2012-10-17 11:26:39
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-17 14:51:08
首先,确认你的表达载体的启动子,看是否是通过IPTG诱导的;其次是筛选诱导培养的条件,包括IPTG的量、诱导温度、转速等等;还有就是诱导蛋白纯化过程了,有的蛋白是以包涵体的形式存在,所以还得注意了。
一切都要靠自己努力
3楼2012-10-17 11:31:37
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiayongxiu at 2012-10-17 11:31:37
首先,确认你的表达载体的启动子,看是否是通过IPTG诱导的;其次是筛选诱导培养的条件,包括IPTG的量、诱导温度、转速等等;还有就是诱导蛋白纯化过程了,有的蛋白是以包涵体的形式存在,所以还得注意了。

能确定是IPTG诱导,我是打算先诱导一下,确定能否能表达之后再优化条件,
4楼2012-10-17 15:31:20
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