24小时热门版块排行榜    

查看: 1364  |  回复: 16

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 狐狸尾巴 at 2012-10-19 16:28:51
你应该说清楚是什么蛋白,用的是什么表达菌株,诱导剂浓度,诱导温度,诱导时间等等,这样别人才好给你解答

现在没有优化这些条件 只是用一个家公认的浓度和时间以及温度来鉴定一下是否能表达 我用的浓度 IPTG 1mM  37℃ 诱导3h
11楼2012-10-19 18:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-19 15:50:04
原核表达 载体pet30a 菌体和上清都没有特异性条带 目的蛋白如果有信号肽会出现什么情况 我从全基因合成到载体构建 都是送到外面生化公司做的 只是回来做个酶切鉴定 然后诱导表达和纯化 以及后续活性实验...

序列前有信号肽会分泌。公司给你做的克隆是否测序?会不会是有移码或者中间有终止密码子?
12楼2012-10-20 06:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:33:33
序列前有信号肽会分泌。公司给你做的克隆是否测序?会不会是有移码或者中间有终止密码子?...

测序了 应该不会有移码或终止密码子
13楼2012-10-20 08:57:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-20 08:57:55
测序了 应该不会有移码或终止密码子...

你的目的基因是从什么物种克隆的?有没有检查密码子使用偏好?
14楼2012-10-20 11:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 11:33:22
你的目的基因是从什么物种克隆的?有没有检查密码子使用偏好?...

大哥 你能不能一次性说完  出现不表达的可能性原因,
15楼2012-10-20 14:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-20 14:08:29
大哥 你能不能一次性说完  出现不表达的可能性原因,...

不同物种的密码子偏好不同。比如说人或者植物的密码子使用和原核生物的不大一样。你要把目的基因按照菌的密码子翻译,看看和序列与原来的氨基酸序列是否一样。而且,如果使用了菌稀有的密码子,表达效率会很差。
16楼2012-10-21 02:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
17楼2013-09-24 15:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxh502976898 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 4/200 2026-03-16 21:52 by Losir
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 材料工程专硕,一志愿中国矿业大学,总分314,求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
信息提示
请填处理意见