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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白诱导表达
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by 狐狸尾巴 at 2012-10-19 16:28:51
你应该说清楚是什么蛋白，用的是什么表达菌株，诱导剂浓度，诱导温度，诱导时间等等，这样别人才好给你解答

现在没有优化这些条件 只是用一个家公认的浓度和时间以及温度来鉴定一下是否能表达 我用的浓度 IPTG 1mM  37℃ 诱导3h
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11楼2012-10-19 18:15:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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9楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-19 15:50:04
原核表达 载体pet30a 菌体和上清都没有特异性条带 目的蛋白如果有信号肽会出现什么情况 我从全基因合成到载体构建 都是送到外面生化公司做的 只是回来做个酶切鉴定 然后诱导表达和纯化 以及后续活性实验...

序列前有信号肽会分泌。公司给你做的克隆是否测序？会不会是有移码或者中间有终止密码子？
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12楼2012-10-20 06:33:33
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:33:33
序列前有信号肽会分泌。公司给你做的克隆是否测序？会不会是有移码或者中间有终止密码子？...

测序了 应该不会有移码或终止密码子
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13楼2012-10-20 08:57:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-20 08:57:55
测序了 应该不会有移码或终止密码子...

你的目的基因是从什么物种克隆的？有没有检查密码子使用偏好？
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14楼2012-10-20 11:33:22
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lxh502976898

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 11:33:22
你的目的基因是从什么物种克隆的？有没有检查密码子使用偏好？...

大哥 你能不能一次性说完  出现不表达的可能性原因，
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15楼2012-10-20 14:08:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by lxh502976898 at 2012-10-20 14:08:29
大哥 你能不能一次性说完  出现不表达的可能性原因，...

不同物种的密码子偏好不同。比如说人或者植物的密码子使用和原核生物的不大一样。你要把目的基因按照菌的密码子翻译，看看和序列与原来的氨基酸序列是否一样。而且，如果使用了菌稀有的密码子，表达效率会很差。
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16楼2012-10-21 02:15:16
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hao327791557
17楼2013-09-24 15:24:43
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